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L1210小鼠白血病传代细胞株

  • 发布日期:2019-07-29 09:35
  • 有效期至:长期有效
  • 招商区域:全国
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【L1210小鼠白血病传代细胞株】详细说明
L1210小鼠白血病传代细胞株
细胞编号: C5002
细胞缩写: L1210细胞
细胞名称: L1210(小鼠淋巴细胞白血病)
T25培养瓶发货形式是用T25细胞培养瓶直接发货的形式。收到细胞后,拆开包装T25培养瓶的自封袋,不拆封口膜,表面喷75%酒精消毒后显微镜观察细胞状态(有条件可以拍下此时细胞照片)。将细胞放入37度培养箱平衡两小时以上,再处理细胞。*先将T25中培养基取出装好备用,如细胞密度高于80%,可以直接消化传代,相反则加入5-6ml培养基放回培养箱继续培养即可。背景资料: L1210体外悬浮培*先由G.Moore等(1966)和P.Himmelfarb等(1967)报导,源于用0.2%甲基胆蒽(乙醚溶解)涂抹雌性小鼠的皮肤诱发的肿瘤。此细胞系广泛用于化学因子和天然产物细胞毒活性的常规筛选。 接种裸鼠在21天内100%成瘤。
细胞来源: 细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国内外*大学建系
"购买细胞注意事项:
1. 收到细胞后*先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书,L1210小鼠白血病传代细胞株了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。
3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落,将细胞置于培养箱内静置培养过夜,隔天再取出观察。此时多数细胞均会贴壁,若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力,如果证实细胞活力正常,请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养;如果染色结果显示细胞无活力,请拍下照片及时和我们联系,信息确认后我们为您再免费寄送一次。
4. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和公司技术部沟通交流。" P4
包装规格: 复苏T25培养瓶(一瓶)或冻存1ml冻存管(两支)
细胞规格: 1*10(5)/ml——1*10(6)/ml
离心管发货形式是用15ml离心管发货的形式,只用于悬浮细胞发货。收到细胞后消毒处理及将细胞放入37度培养箱平衡两小时以上,再处理细胞。*先将T25中培养基取出装好备用(如果实验室没有T25培养瓶,可以暂时T75 培养瓶,加入10-15ml培养基,,建议10ml培养基,也可以使用T175 培养瓶,加入50-60ml培养基,培养瓶越大,需要的培养基越多。当然如果刚接收到细胞密度不够的话,一般不用大瓶子,先用小瓶子养起来再换大的,不然会长得很慢,严重的,会导致细胞死亡等危险),平衡完成后,离心(1000rpm,3min)收集细胞,弃上清,用新的培养基重悬细胞并接种*培养瓶或皿中,放回培养箱继续培养。生物安全级别: 1
细胞种属: 小鼠
组织来源: 淋巴细胞白血病
细胞形态: 淋巴母细胞样
T25瓶及离心管在培养箱平衡是为了让细胞尽快适应培养箱环境,同时使部分因运输导致脱落的细胞贴壁,此步骤非常必要。T25瓶如果在显微镜下可以看到部分不贴壁的细胞,可以收集上清后离心(1200rpm,5min)后,将沉淀用新的培养基重悬后接种*新的培养瓶或皿中。 悬浮
细胞融合度: 95%(Viability by Trypan Blue Exclusion),冻存液中含有DMSO请使用细胞级DMSO,同时浓度不要太高,部分细胞在10%DMSO条件下冻存会死亡,所以DMSO浓度5%-8%是比较推荐的浓度。细胞冻存及复苏遵循慢冻快融的原则,即取0.2-0.3ml的冻存液重悬的细胞于一个冻存管中,与正常体积冻存的细胞共同冻存,*液氮后复苏检查冻存结果。冻检合格前,留一部分细胞继续培养,以防万一。
细胞检测: 细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
"细胞培养三不要:
养科研细胞是生物医学研究的基本功。有三个小经验可以和大家分享一下:
1. 不要烧瓶口。大多数人都喜欢在酒精灯的火焰上关瓶子,觉得这样可以避免污染。不知道大家是不是有培养基怎么越用越发紫的困惑?知道为什么吗?烧瓶口烧的。培养基一般都是用碳酸/碳酸氢跟作缓冲体系。瓶口在火焰上的时候,炽热的空气进入瓶内。塞紧塞子放入冰箱后,空气变冷,压力骤降,培养基中的碳酸就会转化成二氧化碳,释放出来。培养基中的碳酸少了,当然会变碱。如果不烧瓶口的话,你会发现培养液变碱的速度会大大减慢。(当然多多少少还是会有一点越用越碱,因为室温还是比冰箱内的温度高)
其实烧瓶口防止污染纯粹是心理安慰。不妨试一下把手指在火上晃几下,你会发现根本就不会烧疼。如果有细菌的话,这么晃两下也烧不死多少。要想烧死全部细菌,除非把瓶口和塞子烧红。我在国内从来就不烧瓶口。来美国以后发现这里更*,超净台内根本就不点酒精灯。
2. 不要频繁看细胞。对于初学者而言,养细胞就像养孩子一样,有空就要去看看。细胞越是养不好,就越是经常去看。实际上看细胞对细胞的生长没有任何好处,特别是对原代细胞或是免疫磁珠分选后,密度特别低的细胞。培养基中的生长因子是非常有限的。细胞好不容易自分泌一点儿促生长的因子在其周围,形成有利于生长的局部环境。你跑去看细胞,培养瓶这么一晃,把因子都给晃散了。经常可以看到新手一天到晚都在看细胞,细胞老是长不好。老手细胞一扔好几天不管,细胞疯长。
3. 不要怕消化。在传代的时候,初学者往往生怕细胞消化过度,早早地终止消化。细胞没下来就使劲吹灯,吹得满瓶子都是气泡。在我看来,用力吹打对细胞的损伤比消化更大。我师兄在做血管平滑肌原代的时候,37度消化过夜,细胞也没事。我一般是等细胞完全变圆后才中止消化。细胞轻轻一晃就能下来。还有,动作要轻柔,尽量不要产生气泡。气泡在破裂时的机械应力相当大,对细胞的伤害也是很大的。" 选择此细胞合适的培养基(DMEM低糖、DMEM高糖、RPMI-1640、McCoy's 5A等培养基)89%和10%PBS及1%双抗(防止污染)或者此细胞的完全培养基或者此细胞的专用培养基;生长条件:空气,95%;二氧化碳,5%; 温度:37 ℃(模拟人体正常温度培养,这也是体外培养合适的温度)
L1210小鼠白血病传代细胞株传代比例建议1:2-1:3,长得比较快的细胞可以1:3,比较慢的按1:2传代。传代后,建议不要使用传代前培养所使用的培养基,会有大量细胞碎片甚*导致细胞死亡的风险。细胞状态不好或者生长极慢的时候,可以通过增加血清浓度调整细胞状态及生长速度。请不要随意更换培养基,因实验需要,可以逐步驯化(让它们慢慢适应)。传代方法: 建议1:2-1:3 两天换液一次
冻存条件: 详见细胞说明书
冻存液配方:建议使用92%PBS+8%DMSO,客户自身实验室所使用的冻存液也可以适用,血清浓度不低于30%,DSMO含量不高于12%即可。细胞请于细胞培养箱中培养,大部分细胞是37℃,5%CO2,湿度100%环境下培养的。有极少部分细胞培养条件不一致,请仔细阅读相应的细胞说明书,使用正确的培养基及培养条件;细胞于培养瓶或皿中培养,加入适量说明书上标注的细胞相应完全培养基(一般液面高度2-3mm即可)。主要文献: "请具体查阅相关发表文章,接收细胞相关问题:如不能在收到细胞后及时操作细胞,T25及离心管发货的细胞将可以消毒后在37度过夜,血清发货的细胞在室温下静置1-2天(注意不要放冰箱),干冰发货的可以在确认干冰未完全升华时将细胞直接放回液氮或者-80度冰箱,若干冰完全升华,请即刻复苏细胞。
T25瓶及离心管在培养箱平衡是为了让细胞尽快适应培养箱环境,同时使部分因运输导致脱落的细胞贴壁,此步骤非常必要。T25瓶如果在显微镜下可以看到部分不贴壁的细胞,可以收集上清后离心(1200rpm,5min)后,将沉淀用新的培养基重悬后接种*新的培养瓶或皿中。
部分细胞在运输过程中,由于不断震荡及环境不适,可能导致细胞破碎死亡,从而使培养基中漂浮很多细胞碎片及颗粒状物质。这种情况下,平衡后,贴壁细胞用PBS洗两遍再加新的培养基培养或者传代*新瓶中培养即可;悬浮细胞可以离心(1000rpm,3min)收集细胞,并用PBS重悬后再离心一次,再用新的培养基重悬并接种细胞。"
细胞接收后的操作流程与注意事项:
1、如果细胞为贴壁细胞,而收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态,请将悬浮的细胞即时离心,加15%血清的完全培养基到新的培养皿/瓶继续培养3天;同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的完全培养基培养3天。3天后若原瓶或者新瓶中的细胞都没有出现增值而是继续脱落死亡,请及时联系实验室技术人员会跟进解决
2、贴壁细胞生长缓慢;适当提高血清浓度(*高不能超过20%),或可根据该细胞生长密度,考虑胰酶消化后,转移到新的培养瓶继续培养
3、生长不均:贴壁细胞若出现分布不均,成岛状生长,可将细胞进行消化,重悬打散细胞,加入新鲜培养基进行培养
细胞常规培养传代流程(请严格遵照无菌操作)
1、吸出原培养瓶中的培养基,PBS缓冲液润洗细胞两次,加2-3ml 0.25%胰酶进行消化细胞(注意把握消化时间,通常控制在1-2min)
2、镜下观察消化情况,在细胞边缘缩小,贴壁松动时(不建议消化到细胞漂浮)去掉胰酶,加6-8ml完全培养基,轻轻吹打细胞层,尽量把细胞层吹落,吹散
3、取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中,添加适当的完全培养基,把细胞悬液打匀,于培养箱中培养
4、L1210小鼠白血病传代细胞株注意培养基PH值变化情况,定期换液(每周2-3次),待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存
特别注意:(如使用公共实验室或者初次接触细胞培养,建议添加双抗培养)
1、收到细胞后请尽快更换为含15%血清的新鲜培养基,如因特殊情况需要继续使用原瓶,请在原瓶培养基中额外添加10%的血清,(原瓶培养基的继续使用时间*长不宜超过72小时)
2、贴壁细胞收到当天切忌立刻消化,请将细胞换液后放置培养箱孵育到第二天再做消化传代,请优先选择直径6cm的培养皿进行传代培养
3、如签收时出现培养瓶壁破裂,漏液等情况请及时做好照片记录并联系实验室
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