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人miRNA let-7a2质粒的构建及其表达

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-05-08  浏览次数:9
摘 要:目的构建人miRNA let-7a2真核表达质粒,检测其在肺癌细胞A549中的表达。方法以人肺腺癌A549细胞总RNA为模板,将RT-PCR扩增let-7a2的前体(pre-let7a2)序列,克隆至
  • 【题 名】人miRNA let-7a2质粒的构建及其表达
  • 【作 者】关恒云 张菊 张鹏举 陈蔚文 刘闻闻 于春晓 胡晓燕 姜安丽
  • 【机 构】山东大学医学院生物化学与分子生物学研究所 山东大学附属省立医院耳鼻喉头颈外科 山东大学附属省立医院内分泌科
  • 【刊 名】《山东大学学报:医学版》 2009年第2期,-页
  • 【关键词】肺肿瘤 基因表达调控 miRNA let-7a2
  • 【文 摘】目的构建人miRNA let-7a2真核表达质粒,检测其在肺癌细胞A549中的表达。方法以人肺腺癌A549细胞总RNA为模板,将RT-PCR扩增let-7a2的前体(pre-let7a2)序列,克隆至pSilencer4.1-CMVneo表达载体中,构建pSilencer4.1-let7a2重组质粒,转染A549细胞,采用RT-PCR法检测pre-let7a2的表达;构建let-7a2靶序列-报道基因融合质粒pMIR-Report-let7a2T,与pSilencer4.1-let7a2质粒共转染A549细胞,测定相对荧光素酶活性,以检测成熟let7a2在A549细胞中的表达及作用;采用MTT比色法检测pSilencer4.1-let7a2转染对A549细胞增殖的影响。结果构建的人let-7a2真核表达质粒pSilencer4.1-let7a2和let7a2靶序列-报道基因融合质粒pMIR-Report-let7a2T经酶切及测序鉴定正确;pSilencer4.1-let7a2质粒转染A549细胞后,RT-PCR检测pre-let7a2表达较对照组明显增强;MTT比色法显示let-7a2对A549细胞增殖有抑...
 
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  • (1) 肺肿瘤,基因表达调控,miRNA,let-7a2
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