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shRNAmir慢病毒载体沉默鼻咽癌细胞中环氧合酶-2的表达

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-05-08  浏览次数:3
摘 要:目的构建基于miR-155结构的shRNAmir慢病毒表达载体,在鼻咽癌细胞中沉默COX-2基因的表达.探索全新的COX-2抑制方法。方法转染小干扰RNA(siRNA),筛选出沉默COX-2表达的RN
  • 【题 名】shRNAmir慢病毒载体沉默鼻咽癌细胞中环氧合酶-2的表达
  • 【作 者】李刚[1] 李湘平[1] 姜立[2] 鲁娟[1] 刘雄[1] 陈顺金[1]
  • 【机 构】[1]南方医科大学南方医院耳鼻喉科,广东广州510515 [2]南方医科大学基因工程研究所,广东广州510515
  • 【刊 名】《南方医科大学学报》 2009年第29卷第6期,1111-1114页,1118页
  • 【关键词】鼻咽肿瘤 环氧合酶-2 shRNAmir 微小RNA RNA干扰
  • 【文 摘】目的构建基于miR-155结构的shRNAmir慢病毒表达载体,在鼻咽癌细胞中沉默COX-2基因的表达.探索全新的COX-2抑制方法。方法转染小干扰RNA(siRNA),筛选出沉默COX-2表达的RNA干扰序列.以该序列替换miR-155前体序列中的双链部分作为anti-COX-2shRNAmir转录模板,构建pLVTHM/shRNAmir慢病毒质粒表达载体,利用293FT细胞包装pLVTHM/anti-COX-2 shRNAmir慢病毒。感染鼻咽癌C666-1细胞后,通过流式分选.建立anti―COX-2shRNAmir稳定表达,COX-2基因沉默的亚系。结果设计合成的anti.COX-2a siRNA能够使COX-2 mRNA表达下降90%以上,根据其序列构建的pLVTHM/shRNAmir质粒载体测序无误,pLVTHM/anti-COX-2 shRNAmir慢病毒感染C666―1细胞后,分选出亚系C666―1经反复传代仍可保持COX-2基因沉默的表型。结论pLVTHM/shRNAmir慢病毒载体能够转录出基于miR-155结构的shRNAmir,沉默鼻咽癌细胞COX-2的表达,为探索更加高效安全的COX-2抑制剂奠定基础,也为鼻咽癌研究和抗肿瘤基因治疗提供了新手段。
 
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