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不含氨基末端的PIF1解螺旋酶的纯化和初步功能研究

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-05-08  浏览次数:0
摘 要:目的从分子水平阐述人类PIF1解螺旋酶的生理功能,纯化只含有解螺旋酶模序,不含N-末端的PIF1蛋白――PIF1△N,并对其生物化学活性进行检测。方法以Hela细胞的cDNA文库为模版,PCR扩增得到
  • 【题 名】不含氨基末端的PIF1解螺旋酶的纯化和初步功能研究
  • 【作 者】顾永清
  • 【机 构】新疆石河子大学医学院,新疆石河子832002
  • 【刊 名】《西安交通大学学报:医学版》 2009年第30卷第3期,272-275页
  • 【关键词】PIF1解螺旋酶 蛋白纯化 ATP酶
  • 【文 摘】目的从分子水平阐述人类PIF1解螺旋酶的生理功能,纯化只含有解螺旋酶模序,不含N-末端的PIF1蛋白――PIF1△N,并对其生物化学活性进行检测。方法以Hela细胞的cDNA文库为模版,PCR扩增得到PIF1的540~1923的cDNA序列,在cDNA的5’端引入六聚组氨酸标签后插入pET20b表达载体,得到重组质粒pET20-PIF1△N。通过共转化此重组质粒和一个编码稀有rRNA的质粒,PIF1△N蛋白在大肠杆菌中得到表达。在4℃通过一系列亲和层析柱,用高效液相纯化系统纯化了PIF1AN蛋白,并检测其生物化学活性。结果从Hela细胞的cDNA文库中克隆了PIF1蛋白的540~1923的基因片段,使其在大肠杆菌中成功表达。建立了纯化PIF1△N蛋白的亲和层析方法,并检测了其ATP酶活性。结论不含N~末端的PIF1蛋白-PIF1△N,具有依赖镁离子和DNA的ATP酶活性。
 
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