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HIV-1gp120蛋白对人血-视网膜屏障细胞的毒性作用

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-05-08  浏览次数:1
摘 要:目的探索HIV-1gp120蛋白侵犯人血-视网膜屏障的机制。方法原代培养人血-视网膜屏障细胞(HBRBC),包括人视网膜微血管内皮细胞(HRCEC)、人视网膜微血管周细胞(HRCPC)、人视网膜色素上
  • 【题 名】HIV-1gp120蛋白对人血-视网膜屏障细胞的毒性作用
  • 【作 者】林浩添 张振平 余秋蓉 晏丕松 汪琪磷 柏凌
  • 【机 构】中山大学中山眼科中心眼科学周家重点实验室,广州510060
  • 【刊 名】《中华生物医学工程杂志》 2009年第1期,20-26页
  • 【关键词】HIV包膜蛋白质gpl20 血视网膜屏障 细胞毒性实验 细胞凋亡 获得性免 疫缺陷综合征
  • 【文 摘】目的探索HIV-1gp120蛋白侵犯人血-视网膜屏障的机制。方法原代培养人血-视网膜屏障细胞(HBRBC),包括人视网膜微血管内皮细胞(HRCEC)、人视网膜微血管周细胞(HRCPC)、人视网膜色素上皮细胞(HRPE),以培养基作为对照。用MTT法观察7种不同浓度(0.01~0.15mg/L)的HIV-1gp120蛋白作用24h和0.08mg/LHIV-1gp120蛋白作用不同时间(4~72h)对3种细胞的生长抑制作用。0.08、0.1、0.12、0.15mg/L的HIV-1lgp120蛋白作用24h后,用流式细胞仪检测其对3种细胞凋亡率和线粒体膜电位(△ψm)的影响;用Western免疫印迹检测Cleavedcaspase-9蛋白的活化情况。用透射电镜观察经0.08mg/LHIV-1gp120蛋白处理24h前后3种细胞超微结构的变化。结果HIV-1gp120蛋白作用24h,低浓度(〈0.08mg/L)对3种细胞的活性均没有明显影响,而当浓度超过0.08mg/L时,对细胞的增殖活性有明显的抑制作用,呈浓度依赖性(HRCEC:r=-0.763,P〈0.01;HRCPC:r=-0.804,P〈0.01;HRPE:r=-0.698,P〈0.01)。HIV-1gp120蛋白(0.08mg/L)作用12h即可显著抑制细胞的增殖活性,24、48和72h抑制效应更明显,相对增殖率分别为HRCEC:84%、70%、41%、22%,HRCPC:80%、69%、38%、18%,HRPE:86%、73%、45%、26%,抑制效应呈时间依赖性(HRCEC:r=-0.833,P〈0.01;HRCPC:r=-0.784,P〈0.01;HRPE:r=-0.701,P〈0.01)。HIV-1gp120蛋白作用24h后与对照组相比,各浓度组3种细胞凋亡率增加、△ψm明显降低以及Cleavedeaspase-9蛋白表达增强,均呈浓度依赖性。透射电镜示0.08mg/LHIV-1gp120蛋白处理24h后,3种细胞均出现了线粒体肿胀、溶酶体增多等早期凋亡的微观改变。结论HIV-1gp120蛋白能够抑制人血-视网膜屏障细胞的增殖并具有诱导凋亡的作用,破坏线粒体的结构和功能是其可能的机制。
 
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