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CMY型AmpC酶新基因亚型的序列分析与表达载体构建

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-05-08  浏览次数:4
摘 要:目的对两株弗劳地枸橼酸杆菌所产CMY型AmpC酶进行基因克隆、序列分析和重组表达载体的构建。方法以产CMY型AmpC酶的弗劳地枸橼酸杆菌30、31号总基因组DNA为模板,PCR扩增CMY基因,将其克隆
  • 【题 名】CMY型AmpC酶新基因亚型的序列分析与表达载体构建
  • 【作 者】徐韫健[1] 廖伟娇[1] 张晓坤[2] 江洁华[1] 张东梅[1] 张丽梅[1]
  • 【机 构】[1]广州医学院第一附属医院检验科,510120 [2]广州医学院荔湾医院检验科
  • 【刊 名】《中华生物医学工程杂志》 2009年第1期,32-35页
  • 【关键词】AmpC酶 B内酰胺酶类 序列分析 重组质粒 弗劳地枸橼酸杆菌
  • 【文 摘】目的对两株弗劳地枸橼酸杆菌所产CMY型AmpC酶进行基因克隆、序列分析和重组表达载体的构建。方法以产CMY型AmpC酶的弗劳地枸橼酸杆菌30、31号总基因组DNA为模板,PCR扩增CMY基因,将其克隆入pGEM―T载体后测定该核苷酸序列:30、31号菌与受体菌进行质粒接合实验,构建pBV220.CMY重组表达载体。对原菌株和重组菌株进行AmpC酶检测。结果PCR扩增出大小为1146bp的基因片段,与GenBank上多种CMY亚型的基因序列同源性为97%。质粒接合实验证实质粒上含CMY基因,为可转移质粒。三维实验结果显示30、31号菌和重组菌株所产的酶均能水解头孢西丁。结论30、31号菌所产的CMY型AmpC酶为CMY新基因亚型,成功构建重组表达载体pBV220-CMY,为下一步酶的表达和纯化提供了依据。
 
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  • (1) AmpC酶,B内酰胺酶类,序列分析,重组质粒,弗劳地枸橼酸杆菌
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