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携带人VEGF165和ANG-1双基因的腺病毒载体的构建及目的基因的表达

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-11-21  浏览次数:8
摘 要:[目的]构建并鉴定携带人血管内皮细胞生长因子165(VEGF165)和血管生成素-1(ANG-1)双基因共表达重组腺病毒载体pAd-VIA。[方法]采用基因克隆技术克隆目的基因VEGF165、ANG-
  • 【题 名】携带人VEGF165和ANG-1双基因的腺病毒载体的构建及目的基因的表达
  • 【作 者】张金康 孟国林 刘建 胡蕴玉 袁志 段春光 毕龙 白峰 黄鑫 禚文昆 李国臣
  • 【机 构】第四军医大学西京医院全军骨科研究所,西安710032
  • 【刊 名】《中国矫形外科杂志》 2010年第4期,312-315页
  • 【关键词】血管内皮细胞生长因子165 血管生成素-1 腺病毒载体 基因转染
  • 【文 摘】[目的]构建并鉴定携带人血管内皮细胞生长因子165(VEGF165)和血管生成素-1(ANG-1)双基因共表达重组腺病毒载体pAd-VIA。[方法]采用基因克隆技术克隆目的基因VEGF165、ANG-1基因,将得到的基因通过引入内部核糖体进入位点序列(IRES),亚克隆至含有报告基因EGFP的穿梭载体pTrack-CMV中,构建携带双基因的腺病毒穿梭载体pTrack-CMV-VIA。进而使用AdEasy^TM腺病毒系统重组并包装腺病毒。通过绿色荧光蛋白(GFP)表达、酶联免疫吸附分析(ELISA)方法检测制备的腺病毒pAd-VIA感染的大鼠骨髓基质干细胞中外源基因VEGF165及Ang-1的表达。[结果]该重组腺病毒质粒经测序、酶切鉴定,证明基因序列正确。转染QBI-293A细胞后,可观察到GFP明显表达。重组合腺病毒载体pAd-VIA获得成功包装,扩增后病毒滴度为2×10^10PFU/ml,大鼠骨髓基质干细胞转染48 h后,绿色荧光蛋白表达阳性,ELISA结果显示转染组在感染48 h后,培养细胞上清中的VEGF165浓度为(42.5±2.082)ng/10^5细胞,ANG-1浓度为(16.67±2.08)ng/10^5细胞,未转染组几乎未检测到外源基因的表达,有统计学差异(P〈0.05)。[结论]成功构建携带人VEGF165、ANG-1双基因共表达重组腺病毒载体,为组织工程人工骨血管化的研究奠定基础。
 
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