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大鼠周围神经43kDa蛋白的生化初步分析

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-11-21  浏览次数:2
摘 要:目的:提取大鼠损伤坐骨神经组织中表达增强的43kDa蛋白(PNP-43),并对PNP-43进行生化初步分析。方法:纯化抗PNP-43单克隆抗体,将纯化的抗PNP-43单克隆抗体与CNBr-activa
  • 【题 名】大鼠周围神经43kDa蛋白的生化初步分析
  • 【作 者】姚登兵 顾晓松 丁斐 王云丹
  • 【机 构】南通医学院,江苏省神经再生重点实验室,江苏南通226001
  • 【刊 名】《中国临床解剖学杂志》 2004年第22卷第3期,282-285页
  • 【关键词】损伤坐骨神经 43kDa蛋白 亲和层析 MALDI-TOF-MS 大鼠
  • 【文 摘】目的:提取大鼠损伤坐骨神经组织中表达增强的43kDa蛋白(PNP-43),并对PNP-43进行生化初步分析。方法:纯化抗PNP-43单克隆抗体,将纯化的抗PNP-43单克隆抗体与CNBr-activated Sepharose 4B交联,用亲和层析的方法,提取PNP-43,并将提取的PNP-43进行十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PACE)和等电聚焦凝胶电泳(IEF)分析,考马斯亮蓝染色,取SDS-PAGE后染色的43kDa蛋白区带胶条,进行基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱检测(MALDI-TOF-MS),测定肽质量指纹图谱,在相应的蛋白质谱数据库(MS-Fit)中检索。结果:(1)、经层析系统紫外检测,亲和层析后洗脱,在280nm波长处显示一个的紫外吸收峰。(2)、亲和层析获得的蛋白,经SDS-PAGE分析,在43.0kDa标准蛋白位置出现单一蛋白条带。(3)、经IEF。分析,PNP-43的等电点(pI)为5.8。(4)、经MALDI-TOF-MS检测,测定肽质量指纹图谱,通过MS-Fit检索未发现有与该蛋白完全相同的质谱数据。结论:用亲和层析的方法,获得了大鼠损伤坐骨神经组织中表达增强的PNP-43,通过质谱分析和MS-Fit检索提示未发现有与该蛋白完全相同的质谱数据。为进一步深入研究PNP-43的结构与功能提供了科学依据。
 
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