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来自噬菌体抗体库识别KGla细胞的scEv5C1的高效表达、纯化及其生物学特性

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-11-21  浏览次数:7
摘 要:目的 为深入研究源于噬菌体抗体库特定单链抗体(scFv)的功能和其识别抗原的分子特征,将识别KGla细胞的单链抗体5Cl scFv高效表达、纯化;用scFv测定未知抗原的相对分子质量(Mt);并研究5
  • 【题 名】来自噬菌体抗体库识别KGla细胞的scEv5C1的高效表达、纯化及其生物学特性
  • 【作 者】隋建华 李文辉 等
  • 【机 构】[1]中国协和医科大学 [2]中国医学科学院基础医学研究所微生物与免疫学研究室
  • 【刊 名】《中华微生物学和免疫学杂志》 2001年第21卷第4期,437-441页
  • 【关键词】单链抗体 KGla细胞 同型聚集 免疫印迹 包涵体 噬菌体
  • 【文 摘】目的 为深入研究源于噬菌体抗体库特定单链抗体(scFv)的功能和其识别抗原的分子特征,将识别KGla细胞的单链抗体5Cl scFv高效表达、纯化;用scFv测定未知抗原的相对分子质量(Mt);并研究5C1scFv对KGla部分细胞生物学特性的影响。方法 基因重组构建表达5C1scFv的载体pSTE-5Cl,在大肠杆菌中诱导表达,金属离子歼和亲和层析法纯化,获得高纯度的活性5Cl scFv;借助生物素-链亲和素的高亲和力和高灵敏度的显色系统,用Western blot分析其识别的KG1a细胞膜蛋白的Mt;用聚集实验分析5Cl scFv对KGla细胞同型聚集的影响。结果 5Cl scFv在大肠杆菌中获高效表达,纯化后少万籁 蛋白产量可达每升培养物50-60mg,纯度大于95%;成功地测定了其识别抗原的Mt为(85.0/124.5)×10^3。并cl scFv以浓度依赖方式抑制KGla细胞的同型聚集,结论 高效表达纯化的5Cl scFv特异性识别Mt为(85.0/124.5)×10^3的KGla细胞膜表面分子,此分子可能是一种在KGla细胞表面表达的参与细胞同型聚集的分子或受体,这些结果为进一步深入研究抗原本质及克隆抗原分子基因奠定了良好的基础。
 
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  • (1) 单链抗体,KGla细胞,同型聚集,免疫印迹,包涵体,噬菌体
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