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人乳头瘤病毒16型结构基因L1在昆虫细胞中的表达及其生物学活性

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-05-06  浏览次数:7
摘 要:目的 研究与宫颈癌及人类其它多种组织癌症密切相关的人乳头瘤病毒16型(HPV16)的晚期基因L1的表达及其生物学活性。方法 采用PCR法从pBSSK-B/16L1扩增了来自中国妇女鲍温病组织标本的
  • 【题 名】人乳头瘤病毒16型结构基因L1在昆虫细胞中的表达及其生物学活性
  • 【作 者】王立良 宋国兴 等
  • 【机 构】[1]中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所,北京100005 [2]中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所,北京100005
  • 【刊 名】《中华微生物学和免疫学杂志》 2001年第21卷第1期,30-35页
  • 【关键词】人乳头瘤病毒16型 重组杆状病毒 基因表达 病毒样颗粒
  • 【文 摘】目的 研究与宫颈癌及人类其它多种组织癌症密切相关的人乳头瘤病毒16型(HPV16)的晚期基因L1的表达及其生物学活性。方法 采用PCR法从pBSSK-B/16L1扩增了来自中国妇女鲍温病组织标本的HPV16晚期基因L1,装入杆状病毒转移载体;在DH10Bac内通过转座子Tn7的介导,使携带有杆状病毒多角体蛋白基因启动子Ppolh的HPV16 L1基因整合入杆状病毒,形成重组杆状病毒;转染昆虫细胞Sf9进行表达;将感染72h的Sf9细胞包埋、切片、染色后,电镜观察。提取L1蛋白,免疫BALB/ c小鼠。结果 重组杆状病毒在Sf9细胞内高效表达出L1蛋白,经Western blot发现能与L1抗体特异地结合;薄层扫描显示所表达的L1蛋白占Sf9细胞总蛋白的比例高达31%。经透射电镜观察表明,在细胞核里有大量的重组杆状病毒形成;并且产生了大量的由HPV16 L1蛋白单体自组装的病毒样颗粒(virus-like particles,VLP)。小鼠免疫实验结果表明,所表达的HPV16 L1蛋白单体自组装的病毒样颗粒(virus-like particles,VLP)。小鼠免疫实验结果表明,所表达的HPV16 L1蛋白具有强免疫原性。结论 此研究为今后L1基因分子流行病学检查、L1蛋白的结构生物学研究、疫苗研制以及HPV相关基础性研究提供了有用的资料。
 
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