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用噬菌体肽库筛选重组日本血吸虫线粒体相关蛋白的表位

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-05-06  浏览次数:4
摘 要:目的:筛选和鉴定重组的日本血吸虫(中国大陆株)线粒体相关蛋白rSj38的表位。方法:用纯化的rSj338/26GST免疫家兔获得抗rSj338/26GST的多克隆抗体IgG,将抗体进一步纯化,获得抗r
  • 【题 名】用噬菌体肽库筛选重组日本血吸虫线粒体相关蛋白的表位
  • 【作 者】胡雪梅 张兆松 等
  • 【机 构】[1]山东滨州医学院免疫学教研室,滨州256603 [2]南京医科大学分子生物学研究所,分子免疫寄生虫学研究室
  • 【刊 名】《中华微生物学和免疫学杂志》 2002年第22卷第2期,180-184页
  • 【关键词】重组日本血吸虫 噬菌体肽库 筛选 线粒体 相关蛋白 表位
  • 【文 摘】目的:筛选和鉴定重组的日本血吸虫(中国大陆株)线粒体相关蛋白rSj38的表位。方法:用纯化的rSj338/26GST免疫家兔获得抗rSj338/26GST的多克隆抗体IgG,将抗体进一步纯化,获得抗rSj338单特异多克隆抗体IgG。用纯化抗rSj338抗体对噬菌体12肽库进行5轮免疫学筛选,挑取克隆。采用Western blot免疫识别,核苷酸序列测定分析其获得的表位并与rSj338/26GST进行同源性比较。将获得的不同表位的阳性克隆分别免疫小鼠,并采用Western blot及dot-ELISA方法筛选能刺激小鼠产生较高滴度抗rSj338抗体的阳性克隆,并将阳性噬菌体免疫的小鼠血清对纯化的rSj338/26GST,26GST,日本血吸虫成虫及虫卵抗原进行Western blot识别。结果:经5轮免疫学筛选后挑取的32个克隆,用Western blot方法30个克隆能被抗rSj338抗体识别,核苷酸序列分析发现共有11种表位,与rSj338无一级结构的同源性。经动物免疫初步实验筛选。共获得4个免疫原性较强的阳性克隆,其免疫鼠血清均可识别rSj338/26GST,日本血吸虫成虫及虫卵抗原。结论:获得了4种日本血吸虫中国大陆株线粒体相关蛋白rSj338的表位,均为模拟表位,这将为日本血吸虫病的疫苗研究开辟新的途径。
 
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