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汉滩病毒核蛋白纯化及其免疫学特性的研究

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-05-06  浏览次数:5
摘 要:目的 研究汉滩病毒核蛋白及其免疫学特性,研制新一代的肾综合征出血热(HFRS)亚单位疫苗。方法 用亲和层析法纯化重组杆状病毒表达的汉滩病毒核蛋白及野生汉滩病毒76-118的核蛋白,以聚丙烯酰胺凝胶
  • 【题 名】汉滩病毒核蛋白纯化及其免疫学特性的研究
  • 【作 者】林静 杭长寿
  • 【机 构】[1]美国马里兰大学生物化学及分子生物学系 [2]中国预防医学科学院病毒学研究所,北京100052
  • 【刊 名】《中华微生物学和免疫学杂志》 2001年第21卷第1期,40-45页
  • 【关键词】重组杆状病毒 汉滩病毒核蛋白 免疫学特性
  • 【文 摘】目的 研究汉滩病毒核蛋白及其免疫学特性,研制新一代的肾综合征出血热(HFRS)亚单位疫苗。方法 用亲和层析法纯化重组杆状病毒表达的汉滩病毒核蛋白及野生汉滩病毒76-118的核蛋白,以聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹实验(Western blot)鉴定纯化蛋白。用纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,分别以福氏佐剂(FCA)和氢氧化铝[Al(OH)3]为佐剂。以免疫荧光法(IFAT)及酶联免疫法(ELISA)检测抗体滴度;用微量细胞病变中和试验检测中和抗体,用血凝试验检测血凝活性,用血凝抑制试验检测血凝抑制活性;用淋巴细胞转化试验(^3H-TdR掺入法)测定免疫小鼠脾淋巴细胞对汉坦病毒76-118株(野鼠型)和L99(家鼠型)的细胞免疫应答;动物保护试验以长爪沙鼠为感染动物模型,用纯化的核蛋白进行免疫,再用100LD50 76-118进行攻击,然后以免疫荧光法观察鼠肺切片;用MTT比色法观察免疫小鼠巨噬细胞接种汉滩病毒后细胞活力的变化并用免疫荧光法检测免疫小鼠巨噬细胞中的病毒抗原。结果 SDS-PAGE显示单一条带,相对分子质量均为50×10^3,Western blot证明为汉滩病毒核蛋白。小鼠免疫血清抗体滴度分别为1:2560(IFAT)和1:20480(ELISA)。福氏佐剂比氢氧化铝佐剂能更好地加强抗原的免疫原性。小鼠免疫血清用微量细胞病变中和试验未检测到中和抗体。在血凝试验中发现免疫小鼠血清有血凝活性,在血凝抑制试验中发现免疫小鼠血清有微弱的血凝抑制活性。用3H-TdR掺入法结果表明,免疫小鼠的脾淋巴细胞对两型病毒均有特异性增殖反应(特异性刺激指数SSI>2.0),且对两型病毒的增殖性反应无明显差别。在动物保护试验中,鼠肺切片结果表明核蛋白能使长爪沙鼠获得对病毒攻击的保护。MTT法表明汉坦病毒对未免疫对照组巨噬细胞的抑制率分别达47.6%(76-118)和46.6%(L99),而对蛋白免疫组巨噬细胞的抑制作用不明显。巨噬细胞的免疫荧光检测结果表明,用纯化核蛋白免疫的小鼠巨噬细胞,其病毒抗原检测全部阴性,而在对照组中可观察到汉滩病毒典型的特异性荧光颗粒。结论 重组核蛋白和野生核蛋白具有相同的生物学活性,两者均具有良好的免疫原性。其上有血凝活性位点、血凝抑制活性位点及引起细胞免疫的抗原位点,但无中和活性位点。动物保护试验证明其具有免疫保护作用,经其免疫的小鼠巨噬细胞具有特异性的抗病毒感染作用。
 
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