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人B细胞活化相关基因BC―1514全长cDNA的克隆与原核表达

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-11-21  浏览次数:2
摘 要:目的 克隆与B细胞活化相关的新基因及其原核表达。方法 采用差异显示反转录PCR(DDRT-PCR)技术对人扁桃体活化和静止B细胞mRNA的差异表达进行分析。差异显示的片段经过Northern杂交验证后
  • 【题 名】人B细胞活化相关基因BC―1514全长cDNA的克隆与原核表达
  • 【作 者】芦兴武 殷际义 等
  • 【机 构】[1]中国医学科学院中国协和医科大学医学分子生物学国家重点实验室,北京100005 [2]中国医学科学院中国协和医科大学,北京100005
  • 【刊 名】《中华微生物学和免疫学杂志》 2001年第21卷第6期,604-607页
  • 【关键词】差异显示 B淋巴细胞 原核基因表达 cDNA 克隆 BC-1514
  • 【文 摘】目的 克隆与B细胞活化相关的新基因及其原核表达。方法 采用差异显示反转录PCR(DDRT-PCR)技术对人扁桃体活化和静止B细胞mRNA的差异表达进行分析。差异显示的片段经过Northern杂交验证后,作为探针进行入活化B细胞cDNA文库的筛选,将所获得的阳性克隆的编码区经PCR扩增后克隆到原核表达载体pGEX-5X-1中,重组质粒经酶切,测序鉴定后转化大肠杆菌BL-21,以IPTG诱导表达融合蛋白。结果 以在活化B细胞高表达的EST32为探针,经3轮筛选人活化B细胞文库获得一个新的全长为1514bp的cDNA克隆(命名为BC-1514),重组的BC-1514蛋白可在E.coli中以融合蛋白的形式有效表达,其表达量约占细菌总蛋白量的14.3%左右,BC-1514cDNA的GenBank的登录号为AF304442。结论 获得了1条新的与B细胞活化相关的cDNA克隆并在E.coliBL-21中得到了有效表达。
 
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