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我国登革2型病毒43株基因组全长cDNA的构建

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-05-06  浏览次数:4
摘 要:目的 构建我国登革2型病毒43株基因组全长cDNA,为进一步研究其体外RNA转录产物的感染性,阐明致病机理及探索新型疫苗奠定基础。方法 根据登革2型病毒参考株NGC株的核苷酸序列,利用DNASTA
  • 【题 名】我国登革2型病毒43株基因组全长cDNA的构建
  • 【作 者】欧武 秦鄂德 等
  • 【机 构】[1]军事医学科学院微生物流行病学研究所病毒室,北京1008 [2]军事医学科学院微生物流行病学,北京1008
  • 【刊 名】《中华微生物学和免疫学杂志》 2001年第21卷第2期,206-209页
  • 【关键词】登革病毒感染 基因组 全长cDNA 登革病毒
  • 【文 摘】目的 构建我国登革2型病毒43株基因组全长cDNA,为进一步研究其体外RNA转录产物的感染性,阐明致病机理及探索新型疫苗奠定基础。方法 根据登革2型病毒参考株NGC株的核苷酸序列,利用DNASTAR软件设计覆盖登革2型病毒43株基因组的6对重叠引物。从感染登革2型病毒43株的乳鼠脑中提限病毒基因组RNA,采用RT-PCR分别扩增6条基因片段,并将其分别与pGEM-T载体进行连接。重组质粒用PCR进行快速鉴定,并在377A型自动测序仪进行序列分析。然后利用单一酶切位点,分别自阳性重组子上切下各基因片段,在体外分别进行5′半分子和3′半分子的连接,最后将5′和3′半分子连接成基因全长的cDNA。扩增各接头两侧长约457-691bp的基因片段,连接至T载体后测序,从而对全长cDNA进行鉴定。结果 共扩增出6条约1.5-2.5kb的基因自然,并在体外进行连接,获得了全长cDNA。结论 通过测序证实成功地构建了我国登革2型病毒43株基因组全长cDNA分子。本研究结果将为阐明我国登革病毒株的毒力及致病机理奠定基础。
 
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