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葡萄球菌肠毒素B突变体基因表达和功能的初步研究

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-11-21  浏览次数:3
摘 要:目的 应用PCR致突变基因克隆技术,获得抗原性保留,但超原毒性明显下降的葡萄球菌毒素B(SEB)突变体,用作新型淋巴细胞激活分子和超抗原疫苗的研究。方法 用PCR和PCR致变技术,从SEB标准株扩
  • 【题 名】葡萄球菌肠毒素B突变体基因表达和功能的初步研究
  • 【作 者】俞红 钱利生
  • 【机 构】[1]上海医科大学基础医学院微生物学教研室,200032 [2]上海医科大学基础医学院微生物学教研,200032
  • 【刊 名】《中华微生物学和免疫学杂志》 2001年第21卷第2期,200-203页
  • 【关键词】葡萄球菌肠毒素B 突变体蛋白 超抗原 白细胞介素2
  • 【文 摘】目的 应用PCR致突变基因克隆技术,获得抗原性保留,但超原毒性明显下降的葡萄球菌毒素B(SEB)突变体,用作新型淋巴细胞激活分子和超抗原疫苗的研究。方法 用PCR和PCR致变技术,从SEB标准株扩增SEB(SEB-N)和SEB突变基因(SEB-M),分别与原核表达质粒pTrc99A重组,转化大肠杆菌JM109,经筛选获得重组质粒pTrcNb和pTrcMb,用双脱氧链终止法作序列分析。表达的SEB-N和SEB-M蛋白,经双向免疫扩散试验作抗的性鉴定后,刺激小鼠脾细胞并由ELISA法检测培养上清中IL-2的水平。结果 SEB-N150位苏氨酸(密码子ACT)非定向突变为丙氨酸(密码GCT),SEB-M23位天冬酰胺(密码子AAT)定向突变为丝氨酸(密码子AGT)。两种突变基因表达的蛋白均与抗SEB形成明显沉淀线,与天然SEB刺激小鼠脾细胞产生IL-2水平相比,SEB-N格SEB-M突变体蛋白分别下降12.5倍和40倍。结论 获得了能表达SEB-N和SEB-M突变体蛋白的2株工程菌。表达的突变体蛋白具有良好的免疫反应性,但刺激小鼠脾细胞产生白细胞介素2的超抗原生物学活性明显下降。
 
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