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人CD226(PTA1)分子胞膜外区的原核表达、复性及免疫反应性的鉴定

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-05-06  浏览次数:9
摘 要:目的:构建人CD226(PTA1)分子胞膜外区的原核表达载体,并进行复性表达和复性,为该分子的X线结晶衍射及功能学研究提供充足的蛋白来源。方法:将人CD226分子的胞膜外区基因克隆入原核表达载体pBV
  • 【题 名】人CD226(PTA1)分子胞膜外区的原核表达、复性及免疫反应性的鉴定
  • 【作 者】张新海 欧阳为明 等
  • 【机 构】第四军医大学免疫学教研室,西安710032
  • 【刊 名】《中华微生物学和免疫学杂志》 2002年第22卷第6期,587-590页
  • 【关键词】CD226 PTA1 胞膜外区 原核表达 免疫反应性 鉴定 重折叠复性
  • 【文 摘】目的:构建人CD226(PTA1)分子胞膜外区的原核表达载体,并进行复性表达和复性,为该分子的X线结晶衍射及功能学研究提供充足的蛋白来源。方法:将人CD226分子的胞膜外区基因克隆入原核表达载体pBV220,测序证实后,转化突主菌MC1061/P3并进行温度诱导表达,产物采用稀释加透析法复性,亲和层析柱纯化,并通过Western blot和ELISA对其复性效果进行鉴定。结果:温度诱导7h,目的蛋白的表达量达宿主菌总蛋白量的23.8%,其相对分子质量为30×10^3,Wesdtern blot及ELISA证实其重折叠和复性是成功的。结论:成功地获得了人CD226(PTA1)分子胞膜外区的原核表达产物,可用于该分子X线结晶衍射及功能学实验。
 
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