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BJAB细胞在转导6A8α―甘露糖苷酶的反义DNA后发生oncosis样死亡

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-11-21  浏览次数:5
摘 要:目的:采用形态学和分子生物学方法,分析转导6A8α-甘露糖苷酶的反义DNA导致的B细胞株BJAB死亡的性质。方法:用Giemsa染色、annexin-V荧光染色、梯形DNA电泳以及透射电子显微镜等方法
  • 【题 名】BJAB细胞在转导6A8α―甘露糖苷酶的反义DNA后发生oncosis样死亡
  • 【作 者】史耕先 刘音 等
  • 【机 构】[1]中国医学科学院基础医学研究所,北京100005 [2]中国协和医科大学基础医学院免疫学系,北京100005
  • 【刊 名】《中华微生物学和免疫学杂志》 2001年第21卷第5期,480-485页
  • 【关键词】6A8α-甘露糖苷酶 反义6A8DNA BJAB细胞 Oncosis样死亡
  • 【文 摘】目的:采用形态学和分子生物学方法,分析转导6A8α-甘露糖苷酶的反义DNA导致的B细胞株BJAB死亡的性质。方法:用Giemsa染色、annexin-V荧光染色、梯形DNA电泳以及透射电子显微镜等方法,分析细胞死亡的性质;应用ConA结合试验,检测转基因细胞6A8α-甘露糖苷酶活性的改变;应用Fluo-3探针测定细胞胞浆[Ca^2+]i。结果:用重组腺相关病毒(rAAV)颗粒成功地将反义6A8DNA转导入了EB病毒转化的B细胞株BJAB。在克隆中,转导反义6A8 DNA的BJAB细胞在生长到3-10个细胞时死亡,而野生型、转导空载或转导正义6A8 DNA的BJAB细胞生长良好。转导反义6A8 DNA的BJAB细胞呈聚集状生长,且有大量细胞肿胀,最终死亡。Giemsa染色光镜观察、annexin-V荧光染色、梯形DNA电泳及透射电镜观察结果表明,这种死亡是一种oncosis(肿胀死)样死亡。ConA结合试验表明,BJAB细胞在转导反义6A8 DNA后的结合率升高,而转导正义6A8 DNA后的结合率则下降。另外,转导反义6A8 DNA的细胞胞浆[Ca^2+]i升高。结论:转导反义6A8 DNA引起BJAB细胞发生oncosis样死亡,这种死亡可能与6A8α-甘露糖苷酶表达被抑制有关。
 
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