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利用噬菌体随机肽库筛选抗呼吸道合胞病毒多肽的实验研究

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-05-06  浏览次数:0
摘 要:目的:采用完整的呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)颗粒筛选噬菌体肽库,以获得能高亲和力结合并能抑制该病毒复制的特异性多肽,方法:Hep-2细胞培养RSV,
  • 【题 名】利用噬菌体随机肽库筛选抗呼吸道合胞病毒多肽的实验研究
  • 【作 者】赖克方 黄海鹭 等
  • 【机 构】广州呼吸疾病研究所510120
  • 【刊 名】《中华微生物学和免疫学杂志》 2002年第22卷第6期,670-674页
  • 【关键词】呼吸道合胞病毒 噬菌体呈现肽库 DNA测序 RSV 呼吸道感染 儿童
  • 【文 摘】目的:采用完整的呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)颗粒筛选噬菌体肽库,以获得能高亲和力结合并能抑制该病毒复制的特异性多肽,方法:Hep-2细胞培养RSV,采用蔗糖密度梯度(30%、45%、60%)和超滤离心纯化病毒,病毒用生物素标记后,应用M13噬菌体PⅢ呈现随机7肽库进行筛选,经过3轮淘筛后,ELISA进一步鉴定噬菌体克隆与RSV的亲和力,通过TCID50检测其抗病毒复制能力,选取与RSV具有高亲和力的阳性克隆进行DNA测序,据此推导多肽的氨基酸序列,结果:经鉴定得到13个阳性噬菌体克隆能与RSV呈高亲和力结合,其中3个克隆体外能明显抑制RSV的复制,使TCID50由10^-8.1SFU/ml分别降至10^-4.1、10^-4.3、10^3.8SFU/ml。DNA测序发现各个克隆之间缺乏明显的同源序列,但普遍含有较多的脯氨酸,结论:通过噬菌体肽库能筛筛选到抗病毒作用的阳性克隆,为进一步开发高效RSV的诊断和治疗试剂奠定基础。
 
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