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人THANKcDNA的克隆及其在大肠杆菌中表达

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-05-06  浏览次数:2
摘 要:目的 克隆THANKcDNA,并在大肠杆菌中进行表达。方法 采用RT-PCR技术。从人外击血血个核细胞的总RNA中扩增人THANK全长编码区基因及THANK胞外区编码基因,PCR产物直接克隆于pMD-
  • 【题 名】人THANKcDNA的克隆及其在大肠杆菌中表达
  • 【作 者】吴东 沈锋 等
  • 【机 构】第二军医大学东方肝胆外科医院,上海200438
  • 【刊 名】《中华微生物学和免疫学杂志》 2001年第21卷第4期,460-464页
  • 【关键词】THANK RT-PCR 基因克隆 基因表达 大肠杆菌
  • 【文 摘】目的 克隆THANKcDNA,并在大肠杆菌中进行表达。方法 采用RT-PCR技术。从人外击血血个核细胞的总RNA中扩增人THANK全长编码区基因及THANK胞外区编码基因,PCR产物直接克隆于pMD-18T载体中,重组克隆进行DNA测序,将测序证实的THANK胞外区基因亚克隆到原核表达载体pET-11a中,阳性重组子,以Immol/LIPTG进行诱导表达,以SDS-PAGE分析THANK胞外区的表达,对表达的蛋白作初步纯化处理后,进行生物学活性检测。结果 RT-PCR扩增出一个858bp的DNA片段,限制性内切酶图谱分析和测序结果显示,该片段为编码人THANK的cDNA,与公布的人THANK基因序列一致,将胞外区片段克隆人表达载体。转化大肠杆菌表达后发现,与阴性对照相比,在相对分子质量(Mr)26×10^4处多显示出一条条带,对该蛋白进行初步活性测定显示其可显著地抑制U937细胞的生长。结论 本实验成功地克隆了人THANK基因,并将其可溶性胞外区片段在大肠杆菌中进行了表达,表达的重组蛋白可抑制U937细胞的生长,这为进一步进行THANK基因的功能研究及其开发和临床应用奠定了基础。
 
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  • (1) THANK,RT-PCR,基因克隆,基因表达,大肠杆菌
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