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人肝细胞癌相关抗原661基因在大肠杆菌中的克隆、表达及产物纯化

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-11-21  浏览次数:2
摘 要:目的:构建人肝细胞癌相关抗原661(Hepatocellular carcinoma-associated antigens 661,HCA661)原核表达载体并诱导其表达,纯化及鉴定目的蛋白.方法:
  • 【题 名】人肝细胞癌相关抗原661基因在大肠杆菌中的克隆、表达及产物纯化
  • 【作 者】李树蕾 谭岩 刘力华 段秀梅 方艳秋 许淑芬
  • 【机 构】吉林大学基础医学院组织胚胎学教研室,长春,130021 吉林大学第一医院中心实验室,长春,130021 吉林大学第一医院中心实验室,长春,130021 吉林大学第一医院中心实验室,长春,130021 吉林大学第一医院中心实验室,长春,130021 吉林大学第一医院中心实验室,长春,130021
  • 【刊 名】《中国免疫学杂志》 2007年第10期,899-902页
  • 【关键词】人肝细胞癌相关抗原661 基因克隆 原核表达 蛋白纯化 免疫原性
  • 【文 摘】目的:构建人肝细胞癌相关抗原661(Hepatocellular carcinoma-associated antigens 661,HCA661)原核表达载体并诱导其表达,纯化及鉴定目的蛋白.方法:人肝细胞癌SMMC7721细胞基因组DNA经PCR扩增HCA661基因,克隆到pGEM-T easy中进行酶切、PCR和测序鉴定;构建重组质粒pQE-HCA661,并转化大肠杆菌M15[pREP4],经IPTG诱导表达目的蛋白;镍离子亲和层析柱(Ni2+-NTA)纯化靶蛋白后进行Western blot鉴定.结果:目的基因经酶切和PCR鉴定结果与预期相符,测序结果显示目的基因与GeneBank登录的序列完全一致;工程化大肠杆菌M15[pREP4]经IPTG诱导表达约39 kD的目的蛋白.Western blot鉴定结果显示,纯化重组蛋白能够分别与抗His单克隆抗体和抗HCA661多克隆抗体特异性结合.结论:本实验成功地构建了重组原核表达质粒pQE-HCA661,工程菌表达的重组HCA661带有6×His标签,并具有免疫原性,可以用于制备单克隆抗体,或用于检测患者血清中肝细胞癌抗体以预测肿瘤恶性程度.
 
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