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颗粒溶素重组表达载体的构建和原核表达

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-05-06  浏览次数:2
摘 要:目的:构建人颗粒溶素(Granulysin,GNLY)基因的表达载体并在大肠杆菌中表达。方法:抽提体外培养的单个核细胞总RNA,通过RT-PCR的方法获得含有222bp的颗粒溶素cDNA,克隆到pMD
  • 【题 名】颗粒溶素重组表达载体的构建和原核表达
  • 【作 者】钱b 陈孙孝 柯金山 周晔 陈燕 谷明莉 陆慧琦 邓安梅 仲人前
  • 【机 构】第二军医大学长征医院实验诊断科全军临床免疫中心,上海200003
  • 【刊 名】《中国免疫学杂志》 2007年第23卷第9期,778-781页
  • 【关键词】颗粒溶素 原核表达 重组蛋白
  • 【文 摘】目的:构建人颗粒溶素(Granulysin,GNLY)基因的表达载体并在大肠杆菌中表达。方法:抽提体外培养的单个核细胞总RNA,通过RT-PCR的方法获得含有222bp的颗粒溶素cDNA,克隆到pMD18-T载体,测序正确后再亚克隆到质粒pET28a(+)中,构建重组表达质粒pET28a(+)-GNLY,在大肠杆菌中诱导表达并经Ni亲和层析纯化。用SDS-PAGE和Westernblot对表达产物进行鉴定。采用MTT法检测GNLY融合蛋白的生物学活性。结果:酶切结果证实,成功地构建了GN-LY原核表达载体,并在大肠杆菌中获得稳定的表达,表达产物的相对分子质量(Mr)同预期值相一致。结论:成功构建了重组表达质粒pET28a(+)-GNLY,并在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中表达,获得了具有良好的抗原性和特异性的GNLY融合蛋白,为下一步研究人GNLY的功能奠定了基础。
 
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