当前位置: 首页 » 资料 » 健康论文 » 人衰变加速因子DAF基因真核表达系统的构建

人衰变加速因子DAF基因真核表达系统的构建

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-05-06  浏览次数:10
摘 要:目的:构建含人补体调节蛋白衰变加速因子DAF分子的cDNA编码区的真核重组表达载体pcDNA3-DAF,转染NIH3T3细胞,建立稳定表达人DAF的NIH3T3细胞模型。方法:将人DAF分子的cDNA
  • 【题 名】人衰变加速因子DAF基因真核表达系统的构建
  • 【作 者】徐莉 赵舟宙 刘辉 李文鑫
  • 【机 构】武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室,武汉430072
  • 【刊 名】《中国免疫学杂志》 2008年第24卷第12期,1116-1120页
  • 【关键词】衰变加速因子 NIH3T3细胞 稳定转染 真核表达
  • 【文 摘】目的:构建含人补体调节蛋白衰变加速因子DAF分子的cDNA编码区的真核重组表达载体pcDNA3-DAF,转染NIH3T3细胞,建立稳定表达人DAF的NIH3T3细胞模型。方法:将人DAF分子的cDNA编码区克隆到真核表达载体pcDNA3,经酶切和测序鉴定后用磷酸钙沉淀法转染NIH3T3细胞,通过G418筛选,建立稳定转染的NIH3T3细胞株。用PCR检测人DAF基因在NIH3T3细胞基因组中的整合;用RT-PCR、Westernblot实验和间接免疫荧光技术分别从RNA水平和蛋白质水平检测人补体调节蛋白分子DAF在细胞株中的表达。结果:成功构建了pcDNA3-DAF重组真核表达载体,并建立了稳定转染的NIH3T3细胞株,成功地表达了目的基因。PCR检测连续传代30次的NIH3T3pcDNA3-DAF细胞,结果显示人DAF基因仍稳定整合在异源细胞的染色体上,并未随着传代而丢失,为稳定的转染细胞株。结论:真核表达载体构建和稳定转染NIH3T3细胞株的建立为进一步研究人DAF功能和多种补体调节蛋白的协同作用奠定基础。
 
本文导航:
  • (1) 衰变加速因子,NIH3T3细胞,稳定转染,真核表达
  • 下一篇:鳖甲
  • 上一篇:暂无
 
[ 资料搜索 ]  [ 加入收藏 ]  [ 告诉好友 ]  [ 打印本文 ]  [ 关闭窗口 ]

 

 
推荐图文
推荐资料
热门关注