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人幽门螺杆菌外膜蛋白18000DNA疫苗的构建及表达

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-05-06  浏览次数:1
摘 要:目的:构建含人幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H-pylori)18000外膜蛋白编码基因的真核重组载体,并在COS-7细胞中表达,为核酸疫苗的开发奠定基础。方法:从原核表达质粒p
  • 【题 名】人幽门螺杆菌外膜蛋白18000DNA疫苗的构建及表达
  • 【作 者】姜政 余剑平 王新渝 黄爱龙 王丕龙
  • 【机 构】[1]重庆医科大学附属第一医院,重庆400016 [2]自贡市第三人民医院,自贡643000 [3]重庆医科大学应用技术学院,重庆400016 [4]重庆医科大学肝炎研究所,重庆400016
  • 【刊 名】《中国免疫学杂志》 2005年第21卷第2期,134-138页
  • 【关键词】幽门螺杆菌 外膜蛋白 斑点印迹 真核表达载体
  • 【文 摘】目的:构建含人幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H-pylori)18000外膜蛋白编码基因的真核重组载体,并在COS-7细胞中表达,为核酸疫苗的开发奠定基础。方法:从原核表达质粒pET32a(+)/528中,酶切H-pylori 18000外膜蛋白编码基因片段,将目的基因与同样进行酶切、纯化的载体pcDNA3.1进行连接,而后转化并筛选含有目的基因的重组载体pcDNA3.1/528,并在COS-7细胞中表达,以RT-PCR,Western法检测其表达产物。结果:经单、双酶切证实插入的基因片段为H-pylori 18000外膜蛋白编码基因;采用RT-PCR方法,能够从转染的COS-7细胞中扩增出一条与目的基因大小一致的DNA片段,Western法等检测显示,该重组质粒能够在COS-7细胞中表达目的蛋白,而且具有生物活性。结论:成功地构建了核酸疫苗pcDNA3.1/528,并在COS-7细胞中表达,为H-pylori核酸疫苗的研制奠定了良好的基础。
 
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