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λ轻链抗原的克隆与表达

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-05-06  浏览次数:1
摘 要:应用分子生物学方法克隆、表达λ轻链基因、探索有效制备高纯度轻链抗原技术。方法:应用已有pComb3抗-HBsFab表达载体,用限制性双酶切去除Fab中的H链基因,合成互补于两酶点粒端的短核苷酸链,并加
  • 【题 名】λ轻链抗原的克隆与表达
  • 【作 者】韩焕兴 黄宗文 等
  • 【机 构】[1]上海长征医院解放军临床免疫中心,上海200003 [2]上海长征医院呼吸科,上海200003
  • 【刊 名】《中国免疫学杂志》 2001年第17卷第10期,528-530页
  • 【关键词】λ轻链纯化 抗体基因表达 免疫转印
  • 【文 摘】应用分子生物学方法克隆、表达λ轻链基因、探索有效制备高纯度轻链抗原技术。方法:应用已有pComb3抗-HBsFab表达载体,用限制性双酶切去除Fab中的H链基因,合成互补于两酶点粒端的短核苷酸链,并加以多聚组氨酸编码基因,通过复性,连接酶连接构建λ轻链表达载体。结果:重构建载体的单酶切、电泳表明分子的大小为4.4kb,已切除H链基因;阳性株经IPTG诱导表达上清的免疫转印结果显示为抗轻链血清反应带,电泳位置与轻链的分子量吻合,成单一区带;直接ELISA结果表明,正确连接的克隆表达上清与抗Polyhis血清发生反应,结论:用生物工程技术克隆表达λ轻链具有简便,实用的特点,更易获得高纯度产品,是可以替代常规轻链抗原提纯的理想方法。
 
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