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多特异性内参照模板的构建及应用

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-11-21  浏览次数:7
摘 要:目的:构建多特异性内参照模板,用于Fas、FasL、GB、P、TIA-1和β-actin的竞争性PCR定量。方法:体外合成DNA单链,PCR扩增后,得到2个片段。片段1长。145bp,含有Fas、Fa
  • 【题 名】多特异性内参照模板的构建及应用
  • 【作 者】张万君 梅长林 叶朝阳 赵学智 孙田美 孙为民
  • 【机 构】[1]第二军医大学长征医院解放军肾脏病中心,上海200003 [2]第二军医大学免疫学教研室,上海200433
  • 【刊 名】《中国免疫学杂志》 2005年第21卷第3期,207-209页,212页
  • 【关键词】多特异性内参照模板 竞争性RT-PCR 基因
  • 【文 摘】目的:构建多特异性内参照模板,用于Fas、FasL、GB、P、TIA-1和β-actin的竞争性PCR定量。方法:体外合成DNA单链,PCR扩增后,得到2个片段。片段1长。145bp,含有Fas、FasL、GB、P、TIA-1和pactin的5’引物序列;片段2长147bp,含有相同基因的3’引物序列。将片段1、2分别克隆在载体PKF3上。结果:克隆载体经酶切鉴定及DNA序列测定,证实为本实验所设计的多特异性内参照模板,以此为模板,用不同的引物进行PCR扩增,即可得到相应的竞争内参照。应用多特异性内参照模板对移植肾急性排斥患者外周血淋巴细胞中TIA-1进行定量,结果显示,底物量在一定范围内,靶序列和竞争性内参照模板的扩增效率基本一致,尤其是在指数期。这一结果同样适用于Fas、FasL、GB、P和β-actin的定量。结论:本实验构建的多特异性内参照模板可用于6种基因的竞争性PCR检测,为进一步研究打下了基础。
 
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