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腺病毒介导CⅡTA突变体基因转移抑制MHCⅡ类分子表达的体外研究

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-05-06  浏览次数:3
摘 要:目的:构建携带小鼠MHCⅡ类分子反式激活因子(MHC class Ⅱ molecule transactivator,CⅡTA)突变体基因的腺病毒,并观察腺病毒介导该基因的表达情况以及表达产物的体外功
  • 【题 名】腺病毒介导CⅡTA突变体基因转移抑制MHCⅡ类分子表达的体外研究
  • 【作 者】管政 张军 沈茜
  • 【机 构】第二军医大学长海医院实验诊断科,上海,200433 第二军医大学长海医院实验诊断科,上海,200433 第二军医大学长海医院实验诊断科,上海,200433
  • 【刊 名】《中国免疫学杂志》 2007年第10期,872-877页,882页
  • 【关键词】CⅡTA 突变体 MHCⅡ类分子 腺病毒
  • 【文 摘】目的:构建携带小鼠MHCⅡ类分子反式激活因子(MHC class Ⅱ molecule transactivator,CⅡTA)突变体基因的腺病毒,并观察腺病毒介导该基因的表达情况以及表达产物的体外功能.方法:采用常规分子生物学方法从IFN-γ诱导后的BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞中获得Ⅳ型CIITAcDNA;利用重叠延伸PCR法构建CIITA突变体基因,并克隆入表达载体pIRES;采用pAdEasy-1系统获得具有感染能力的、携带CIITA突变体基因的缺陷型重组腺病毒(Ad-CIITAm)和空载对照病毒(Ad-GFP),并经大量扩增、纯化及滴度测定;将Ad-CⅡTAm和Ad-GFP分别感染HeLa细胞和Raji细胞,流式细胞术观察对诱导型和组成型HLA-DR分子表达的影响.结果:成功克隆了小鼠CⅡTA突变体基因,并构建了携带小鼠CⅡTA突变体基因的重组腺病毒Ad-CⅡTAm;经流式细胞术证实感染Ad-CⅡTAm的Hela和Raji细胞较感染Ad-GFP的细胞,其表面HLA-DR分子的表达均受到明显的抑制.结论:本实验证实了重组腺病毒介导表达的小鼠CⅡTA突变体在体外能够有效地抑制MHCⅡ类分子的表达.
 
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