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U251细胞血清饥饿特异抗原的ScFv噬菌体抗体库构建

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-05-06  浏览次数:13
摘 要:目的:构建一个U251细胞血清饥饿特异抗原ScFv噬菌体抗体库。方法:将U251细胞进行48小时的血清饥饿培养,将其细胞裂解液免疫4周龄的BALB/c小鼠,提取被免疫小鼠脾脏细胞总RNA,反转录成cD
  • 【题 名】U251细胞血清饥饿特异抗原的ScFv噬菌体抗体库构建
  • 【作 者】余敏 尚海 谭德勇 孙桂林
  • 【机 构】云南大学生命科学学院生物化学与分子生物学实验室,昆明650091
  • 【刊 名】《中国免疫学杂志》 2007年第23卷第8期,727-731页
  • 【关键词】U251细胞 血清饥饿 ScFv 噬菌体展示 抗体库
  • 【文 摘】目的:构建一个U251细胞血清饥饿特异抗原ScFv噬菌体抗体库。方法:将U251细胞进行48小时的血清饥饿培养,将其细胞裂解液免疫4周龄的BALB/c小鼠,提取被免疫小鼠脾脏细胞总RNA,反转录成cDNA,利用RT-PCR扩增免疫球蛋白IgG的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因,用一个柔性片段(Linker)连接VL和VH基因片段,将连接产物重组到pCANTAB-5E载体,转入TG1菌株中,随后加入辅助噬菌体(Help phage)M13K07超感染,构建单链抗体片段(Single chain fragment of variation,ScFv)噬菌体抗体库。结果:经过富集筛选后,库容量达到3×10^6cfu/L,随机挑取8个克隆进行ELISA检测,获得了1个阳性克隆。结论:成功构建了一个具有一定库容的U251细胞血清饥饿特异抗原的单链抗噬菌体抗体库,为筛选血清应答蛋白抗体、进一步克隆血清应答蛋白的基因奠定基础。
 
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