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R31L TNF-α突变体重组质粒的构建、真核表达及其产物的胞毒效应

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-05-06  浏览次数:7
摘 要:目的:研究膜型、分泌型TNF-α的31位氨基酸在其生物学效应中的作用,进一步探讨TNF-α结构与生物学效应的关系。方法:采用重叠PCR方法将wt TNF-α31位精氨酸(R)密码子(CGC)定点突变替
  • 【题 名】R31L TNF-α突变体重组质粒的构建、真核表达及其产物的胞毒效应
  • 【作 者】刘丽丽 万琳 尹丙姣 杨林 曾庆岭 李清芬 李卓娅
  • 【机 构】华中科技大学同济医学院免疫学研究所,湖北武汉430030
  • 【刊 名】《中国免疫学杂志》 2008年第24卷第11期,967-971页,975页
  • 【关键词】跨膜TNF-α 分泌型TNF-α 定点突变 胞毒效应
  • 【文 摘】目的:研究膜型、分泌型TNF-α的31位氨基酸在其生物学效应中的作用,进一步探讨TNF-α结构与生物学效应的关系。方法:采用重叠PCR方法将wt TNF-α31位精氨酸(R)密码子(CGC)定点突变替换成亮氨酸(L)密码子(CTC),构建R31L TNF-α-pcDNA3.0重组质粒,经酶切、PCR及DNA测序鉴定后,采用脂质体转染法将其瞬时转染COS-7细胞进行表达,通过MTT法检测R31LTNF-α突变体的胞毒效应。结果:酶切、PCR及测序鉴定证实目的基因R31LTNF-α正确连接到pcDNA3.0的多克隆位点;TNF-α31位突变可增强sTNF-α的胞毒效应,突变体的CC50值是野生型的1/10,而对mTNF-α的生物学效应无明显影响。结论:本实验成功地构建了R31L TNF-α-pcDNA3.0重组质粒,且在真核细胞COS-7中获得表达;TNF-α31位置换成亮氨酸后,主要增强其分泌型分子的胞毒效应,而对其膜分子无作用。
 
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