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重组多肽酶联免疫吸附法检测抗LKM-1抗体的初步应用

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-11-21  浏览次数:5
摘 要:目的:制备人自身抗原细胞色素P4502D6(CYP2D6)257-351位氨基酸片段融合蛋白作为自身抗原,探讨ELISA检测抗LKM-1抗体的敏感性和特异性。方法:以肝脏的cDNA混合文库为模板作PC
  • 【题 名】重组多肽酶联免疫吸附法检测抗LKM-1抗体的初步应用
  • 【作 者】王文凯 李永哲 段秀杰
  • 【机 构】[1]江苏大学附属人民医院检验科,江苏镇江212002 [2]中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院检验科,北京100730
  • 【刊 名】《中国免疫学杂志》 2008年第24卷第11期,1021-1024页,1027页
  • 【关键词】重组 表位 抗LKM-1抗体 酶联免疫吸附测定
  • 【文 摘】目的:制备人自身抗原细胞色素P4502D6(CYP2D6)257-351位氨基酸片段融合蛋白作为自身抗原,探讨ELISA检测抗LKM-1抗体的敏感性和特异性。方法:以肝脏的cDNA混合文库为模板作PCR,将PCR产物与真核表达载体pEGH共同转化酿酒酵母Y258,碱裂解法进行质粒制备,PCR扩增鉴定。表达载体构建成功后,在半乳糖的诱导下表达产生重组融合蛋白,经GST亲和层析法进行纯化后,免疫印迹法鉴定抗原性,ELISA检测抗LKM-1抗体阳性血清及部分其他结缔组织病患者血清中的抗LKM-1抗体。结果:重组融合蛋白在宿主菌中获得表达,免疫印迹法鉴定表明其能与标准抗LKM-1抗体阳性血清反应,而与正常血清、其他抗血清无反应。在26份抗LKM-1抗体阳性血清中,6份抗HCV抗体阳性血清用重组多肽ELISA检测有5份呈阳性,其余20份血清用重组多肽ELISA检测均呈阳性;20份其他结缔组织病患者血清用重组多肽ELISA检测均为阴性。结论:重组的257-351位氨基酸片段是CYP2D6抗原的主要抗原表位区域,以重组多肽为基质ELISA检测抗LKM-1抗体的敏感性较高,为进一步研究抗体水平与临床病情变化的相关性奠定了基础。
 
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