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PFP、GrB真核共表达载体的构建及表达分析

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-05-06  浏览次数:7
摘 要:目的:体外扩增出PFP、GrB基因的全片段并构建共表达重组体pVAX1-PIG(即pVAX1-PFP-IRES-GrB),分析其在人喉癌细胞Hep-2中的表达情况。方法:利用RT-PCR的方法从人的喉
  • 【题 名】PFP、GrB真核共表达载体的构建及表达分析
  • 【作 者】李秀英 夏良平 赖延东
  • 【机 构】[1]暨南大学药学院基因组药物研究所,广州510632 [2]中山大学肿瘤防治中心华南肿瘤学国家重点实验室,广州510632 [3]广州医学院化学致癌研究所,广州510632
  • 【刊 名】《中国免疫学杂志》 2008年第24卷第6期,492-495页
  • 【关键词】穿孔素 颗粒酶B 共表达 间接免疫荧光
  • 【文 摘】目的:体外扩增出PFP、GrB基因的全片段并构建共表达重组体pVAX1-PIG(即pVAX1-PFP-IRES-GrB),分析其在人喉癌细胞Hep-2中的表达情况。方法:利用RT-PCR的方法从人的喉癌组织浸润淋巴细胞中扩增全长PFP、GrB的cDNA片段并构建共表达重组体pVAX1-PIG。利用脂质体LipofectamineTM2000将重组真核表达载体pVAX1-PIG转染入人的Hep-2细胞株中,采用RT-PCR、间接免疫荧光法分析其在人Hep-2中的表达情况。结果:经双酶切、测序法证实已成功扩增PFP、GrB基因的全长cDNA,并构建共表达重组体pVAX1-PIG,在荧光显微镜下可见已转染pVAX1-PIG的人Hep-2细胞的胞浆发出苹果绿色荧光。结论:成功扩增PFP、GrB全片段、构建共表达重组体pVAX1-PIG,并在人Hep-2细胞中检测到PFP、GrB蛋白的表达,穿孔素(PFP)/颗粒酶B共同表达能够介导细胞的凋亡,为其在喉癌治疗中的应用研究奠定了基础。
 
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  • (1) 穿孔素,颗粒酶B,共表达,间接免疫荧光
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