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幽门螺杆菌Cag致病岛he0527基因的缺失株构建和鉴定

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-05-06  浏览次数:10
摘 要:目的:构建幽门螺杆菌(H.brylori)Cag致病岛编码hp0527基因的突变株。为Cag致病岛致病机制及H.pylori功能研究奠定基础。方法:利用基因同源重组方法将卡那霉素抗性基因(KanR)连
  • 【题 名】幽门螺杆菌Cag致病岛he0527基因的缺失株构建和鉴定
  • 【作 者】母润红 邵世和 钟桥 韩军 黄河 田树伟
  • 【机 构】[1]江苏大学基础医学与医学技术学院病原生物学研究室,镇江212013 [2]北华大学医学检验学院,吉林132013
  • 【刊 名】《中国免疫学杂志》 2009年第25卷第10期,932-935页,939页
  • 【关键词】幽门螺杆菌 Ⅳ型分泌系统 同源重组 突变体
  • 【文 摘】目的:构建幽门螺杆菌(H.brylori)Cag致病岛编码hp0527基因的突变株。为Cag致病岛致病机制及H.pylori功能研究奠定基础。方法:利用基因同源重组方法将卡那霉素抗性基因(KanR)连接到PCR扩增hp0527两端区域产生的2个日的基因片段之间,构建hp0527基因缺失的自杀质粒pBlueKM40-△hp0527;将带有卡那霉素抗性标志的缺失突变载体,通过抗生素卡那霉素筛选出缺失hp0527基因的突变株,并经PCR方法鉴定后,采用野生株和突变株的幽门螺杆菌分别与胃癌上皮细胞BGC-823共培养后,分析它们对细胞毒素相关蛋白CagA转运能力的影响。结果:成功构建出幽门螺杆菌hp0527基因突变的自杀质粒,突变载体经内切酶酶切分析显示:产生的条带与设计结果完全一致;抗生素筛选并经PCR鉴定后,获得了hp0527基因缺失株;CagA蛋白转运分析表明基因hp0527缺失前后,可以导致细菌转运CagA蛋白能力的丧失。结论:成功构建出1株缺失hp0527基因的H.pylori突变株,对于阐明该基因的功能及其在H.pylori致病中的地位及作用具有重要的研究价值。
 
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