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RNAi介导Caspase-3基因及其抑制LPS诱导肾脏上皮细胞凋亡的研究

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-11-21  浏览次数:3
摘 要:目的:探讨RNA干扰Caspase-3基因及抑制LPS诱导的肾脏上皮细胞凋亡的作用效果。方法:构建针对大鼠Caspase-3基因编码区的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体质粒pRNAT―U6.1
  • 【题 名】RNAi介导Caspase-3基因及其抑制LPS诱导肾脏上皮细胞凋亡的研究
  • 【作 者】张艳 陈栋 贡福盛 刘健 刘晓晴
  • 【机 构】[1]华中科技大学同济医学院附属同济医院综合医疗科,武汉430030 [2]华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所,教育部、卫生部器官移植重点实验室,武汉430030
  • 【刊 名】《中国免疫学杂志》 2008年第24卷第1期,16-19页
  • 【关键词】RNA干扰 Caspase-3 基因沉默 细胞凋亡
  • 【文 摘】目的:探讨RNA干扰Caspase-3基因及抑制LPS诱导的肾脏上皮细胞凋亡的作用效果。方法:构建针对大鼠Caspase-3基因编码区的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体质粒pRNAT―U6.1-Caspase-3shRNA,用电穿孔法转染RK3E细胞,经G418筛选后,形成稳定的表达Caspase-3shRNA的细胞系。实验分为3组:①正常对照组:未转染的RK3E细胞;②阴性对照组:转染空载体pRNAT-U6.1的RK3E细胞系;③实验组:转染Caspase-3shRNA的RK3E细胞系。经脂多糖(LPS)孵育12小时后,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,RT-PCR检测mRNA的表达,以及各组Caspase-8蛋白的活性。结果:与正常对照组和阴性对照组相比,实验组的细胞凋亡率显著降低(P〈0.01),Caspase-3的mRNA水平和蛋白活性显著降低(P〈0.01)。结论:针对Caspase-3的特异性短发夹RNA可以明显引起靶基因的沉默,进而抑制LPS诱导的肾脏上皮细胞凋亡的发生。
 
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  • (1) RNA干扰,Caspase-3,基因沉默,细胞凋亡
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