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胰淀素Fab抗体的筛选及初步鉴定

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-05-06  浏览次数:7
摘 要:目的:从人天然Fab噬菌体抗体库中筛选胰淀素(amylin又称为胰岛淀粉样多肽)Fab抗体,测定其特异性及抗原结合活性。方法:以胰淀素为抗原,对抗体库进行5轮"吸附-洗脱-扩增"的富集筛选;将从人源噬
  • 【题 名】胰淀素Fab抗体的筛选及初步鉴定
  • 【作 者】甄云凤 李常颖 畅继武 朱铁虹
  • 【机 构】[1]天津医科大学总医院内分泌科,天津300052 [2]天津医科大学第二医院泌尿外科研究所,天津300052
  • 【刊 名】《中国免疫学杂志》 2009年第25卷第12期,1112-1115页
  • 【关键词】胰淀素 噬菌体抗体库 免疫球蛋白类 Fab 鉴定
  • 【文 摘】目的:从人天然Fab噬菌体抗体库中筛选胰淀素(amylin又称为胰岛淀粉样多肽)Fab抗体,测定其特异性及抗原结合活性。方法:以胰淀素为抗原,对抗体库进行5轮"吸附-洗脱-扩增"的富集筛选;将从人源噬菌体抗体库中筛选出的阳性克隆,提取其质粒、切除gⅢ、自身环化并转入大肠杆菌中,以IPTG诱导表达可溶性抗体,最后用SDS-PAGE鉴定抗体表达情况、ELISA鉴定抗原结合活性和特异性。结果:成功筛选并表达了抗胰淀素的可溶性Fab抗体,经SDS-PAGE蛋白电泳,在相对分子质量约为47 kD处可见一蛋白条带。ELISA和Western blot证实了该Fab片段与胰淀素抗原的结合活性和特异性。结论:利用噬菌体抗体库技术获得了人源性的特异抗胰淀素Fab抗体,为临床进行下一步研究奠定了基础。
 
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