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抗转铁蛋白受体双价抗体的构建、表达及鉴定

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-05-06  浏览次数:8
摘 要:目的:抗转铁蛋白受体(TfR)双价抗体(bsFv)构建、表达及其与细胞结合的活性鉴定。方法:以抗TfR的单链抗体(scFv)为模板,设计引物引入中问连接肽(G4S)及酶切位点AscI,通过PCR方法扩
  • 【题 名】抗转铁蛋白受体双价抗体的构建、表达及鉴定
  • 【作 者】肖代雯 朱慧芬 沈昕 邢薇 黄宇 雷萍 黄韬 王国斌 沈关心
  • 【机 构】华中科技大学同济医学院,武汉430030
  • 【刊 名】《中国免疫学杂志》 2008年第24卷第1期,59-61页
  • 【关键词】转铁蛋白受体 单链抗体 双价抗体
  • 【文 摘】目的:抗转铁蛋白受体(TfR)双价抗体(bsFv)构建、表达及其与细胞结合的活性鉴定。方法:以抗TfR的单链抗体(scFv)为模板,设计引物引入中问连接肽(G4S)及酶切位点AscI,通过PCR方法扩增两条scFv片段,将其连接并克隆至原核表达载体pAB1,转化大肠杆菌TG1,阳性菌经IPTG诱导表达,FCM检测bsFv与K562,HepG2肿瘤细胞结合的活性及特异性。结果:酶切鉴定及DNA测序证明该bsFv构建成功;SDS-PAGE、Westernblot鉴定表明表达蛋白分子量与bsFv理论值一致;FCM结果证明bsFv可与K562,HepG2肿瘤细胞特异性结合,且结合的阳性率较scFv有所提高。结论:成功构建了抗转TfR的bsFv,且能与K562,HepG2肿瘤细胞特异性结合。
 
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