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逆转录病毒介导的小鼠IL-23基因在鼠高转移性乳腺癌细胞系MA-891中的表达

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-11-21  浏览次数:3
摘 要:目的:建立表达小鼠IL-23基因的鼠乳腺癌细胞系IL-23/MA-891,探讨外源性IL-23基因对MA-891细胞生长及其生物学性状的影响。方法:将插入IL-23基因的质粒,应用逆转录病毒载体LXS
  • 【题 名】逆转录病毒介导的小鼠IL-23基因在鼠高转移性乳腺癌细胞系MA-891中的表达
  • 【作 者】刘爽 冯永路 单保恩
  • 【机 构】河北医科大学第四医院,石家庄050011
  • 【刊 名】《中国免疫学杂志》 2008年第24卷第3期,219-223页
  • 【关键词】逆转录病毒载体 IL-23基因 转染 鼠乳腺癌细胞
  • 【文 摘】目的:建立表达小鼠IL-23基因的鼠乳腺癌细胞系IL-23/MA-891,探讨外源性IL-23基因对MA-891细胞生长及其生物学性状的影响。方法:将插入IL-23基因的质粒,应用逆转录病毒载体LXSN经感染皿(ecotropic)和PA317(amphotropic)两种包装细胞包装,经G418筛选获得表达IL-23分子的PA317阳性细胞克隆,用IL-23/PA317培养上清转染MA-891细胞,获得表达IL-23的IL-23/MA-891细胞。分别用RT-PCR法、ELISA法和免疫组化染色法分析IL-23/MA-891细胞表达IL-23的mRNA和蛋白的水平,筛选出高表达IL-23的IL-23/MA-891细胞克隆用于下层研究中;用流式细胞仪检测MA-891细胞中MI-ICⅠ、MI-ICⅡ、CD80、CD86以及FAS蛋白的表达、细胞周期变化及细胞凋亡情况;用ELISA法检测IL-23/MA-891细胞培养上清诱导脾细胞分泌IFN-γ的能力,用MTT比色法检测细胞增殖反应。结果:外源性IL-23基因转染的小鼠乳腺癌细胞系IL-23/MA-891,在mRNA水平和蛋白水平均可获得稳定表达;IL-23/MA-891细胞与LXSN/MA-891和MA-891比较,细胞周期及细胞凋亡率无显著性差异(P〉0.05),H-2Kb(MHCⅠ类分子)、Ⅰ―Ab(MHCⅡ/类分子)、CD80、CD86以及FAS蛋白的表达水平无显著性差异(P〉0.05);IL-23/MA-891细胞的增殖反应与LXSN/MA-891和MA-891细胞相比虽有所降低,但无显著性差异(P〉0.05)。然而,IL-23/MA-891细胞的培养上清可明显促进小鼠脾细胞分泌IFN-γ(P〈0.01)。结论:建立的稳定表达IL-23的IL-23/MA-891细胞,具有较强的免疫学调节活性,其生物学形状与MA-891和LXSN/MA-891细胞相比较没有明显差异,但可进一步用于肿瘤相关免疫基因治疗的研究。
 
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