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人可溶性粘附素5截短体的克隆、表达及生物活性测定

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-05-06  浏览次数:6
摘 要:目的:克隆和转染人可溶性粘附素5截短体(sCadherin5△),并检测其生物活性。方法:RT―PCR扩增Cadher-in5△cDNA,并克隆人pMSCV逆转录病毒载体,构建pMSCV/sCadhe
  • 【题 名】人可溶性粘附素5截短体的克隆、表达及生物活性测定
  • 【作 者】李文林 石小玉 熊丽霞 王志刚 周莹 李红
  • 【机 构】[1]南昌大学,南昌330006 [2]南昌大学医学院,南昌330006 [3]江西省医学科学研究所,江西省医学生物高技术重点实验室,南昌330006 [4]DIFEMA, Facuhé de Médecine et de Pharmacie de Rouen, 76000 Rouen, France CNRS
  • 【刊 名】《中国免疫学杂志》 2008年第24卷第1期,62-64页,70页
  • 【关键词】粘附素5 克隆 逆转录病毒载体 NIH3T3细胞 HUVEC细胞
  • 【文 摘】目的:克隆和转染人可溶性粘附素5截短体(sCadherin5△),并检测其生物活性。方法:RT―PCR扩增Cadher-in5△cDNA,并克隆人pMSCV逆转录病毒载体,构建pMSCV/sCadherin5△,转化感受态大肠杆菌XL―blue菌株,提取、纯化和酶切质粒,测序分析sCadherin5△,转染NIH3T3细胞,mRNA和蛋白质水平检测NIH3T3细胞表达和分泌sCadherin5△,MTT方法检测sCadherin5△生物活性。结果:PCR产物约为1128bp,构建了pMSCV/sCadherin5△质粒载体,序列测定的结果与GeneBank中Cadherin5胞膜外区121bp至1248bp之间的序列一致。pMSCV/sCadherin5△转染的NIH3T3细胞表达和分泌sCadherin5△,sCadhefin5△抑制HUVEC细胞体外增殖。结论:克隆、表达和分泌了具有生物活性的人sCadherin5△。
 
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