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抗TfR scFv-SLC融合蛋白的构建、表达与鉴定

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-11-21  浏览次数:2
摘 要:目的:构建、表达和鉴定抗转铁蛋白受体(TfR)单链抗体(scFv)-次级淋巴组织趋化因子(SLC)融合蛋白。方法:以pDsRed2-N1-CCL21为模板,设计引物,采用PCR扩增得到两端有EcoRⅠ
  • 【题 名】抗TfR scFv-SLC融合蛋白的构建、表达与鉴定
  • 【作 者】潘兴飞 刘静 沈听 许海霞 姚欣欣 陈广生 胡军 朱慧芬 雷萍 沈关心
  • 【机 构】华中科技大学同济医学院免疫学系,武汉430030
  • 【刊 名】《中国免疫学杂志》 2009年第25卷第9期,832-834页,843页
  • 【关键词】转铁蛋白受体 单链抗体 次级淋巴组织趋化因子 融合蛋白
  • 【文 摘】目的:构建、表达和鉴定抗转铁蛋白受体(TfR)单链抗体(scFv)-次级淋巴组织趋化因子(SLC)融合蛋白。方法:以pDsRed2-N1-CCL21为模板,设计引物,采用PCR扩增得到两端有EcoRⅠ、NotⅠ酶切位点的SLC基因。以EcoRⅠ、NotⅠ双酶切pET28a^+scFv载体和PCR产物,连接后转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导TfRscFv-SLC融合蛋白的表达。SDS-PAGE、Western blot分析TfR scFv-SLC的表达特性。FCM测定scFv-SLC与肿瘤细胞结合活性。结果:EcoRⅠ和NotⅠ双酶切鉴定可见约350bp的小片段,与SLC的理论值相符,DNA测序结果表明含有TfRscFv-Linker-SLC序列,表明pET28a^+scFv-SLC融合基因表达载体构建成功。IPTG诱导产物经SDS-PAGE分析可见约41kD的条带,符合scFv-SLC理论值。FCM结果显示TfR scFv-SLC可与MCF-7、HepG2细胞结合,且结合的阳性率较TfRscFv有所提高。结论:成功构建与表达scFv-SLC融合蛋白,且能与MCF7、HepG2等细胞特异性结合。
 
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