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小鼠GITRL融合蛋白的表达、纯化及免疫原性的研究

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-11-21  浏览次数:15
摘 要:目的:构建含小鼠G1TRL基因原核表达载体,经转化E.coli以表达GITRL融合蛋白,纯化蛋白并制备相应的抗血清。方法:将GITRL-pMDl8.T重组质粒经EcoRⅠ和salⅠ双酶切回收目的基因,
  • 【题 名】小鼠GITRL融合蛋白的表达、纯化及免疫原性的研究
  • 【作 者】马洁 王胜军 毛朝明 杨敏 王锁英 许小朋 邱谷风 胡正军 姜旭淦 邵启祥 丁庆 许化溪
  • 【机 构】[1]江苏大学检验医学研究所免疫学研究室,镇江212013 [2]江苏大学附属医院,镇江212001
  • 【刊 名】《中国免疫学杂志》 2009年第25卷第8期,675-677页,683页
  • 【关键词】GITRL 蛋白表达 融合蛋白 小鼠
  • 【文 摘】目的:构建含小鼠G1TRL基因原核表达载体,经转化E.coli以表达GITRL融合蛋白,纯化蛋白并制备相应的抗血清。方法:将GITRL-pMDl8.T重组质粒经EcoRⅠ和salⅠ双酶切回收目的基因,与原核表达载体PET32a连接,应用电转法转化BL21(DE3)菌。阳性克隆经鉴定后用ilrrG诱导GITRL蛋白表达,经Ni^+-NTA层析柱纯化融合蛋白,通过SDS-PAGE、Westem blot进行特异性鉴定,CD4^+CD25^+T细胞免疫抑制试验验证其生物学功能。采用弗氏完全佐剂常规免疫方案,制备抗GITRL抗血清,抗血清的效价和特异性测定采用双向琼脂免疫扩散法。结果:经酶切鉴定和测序分析证实原核表达质粒构建正确,SDS-PAGE和Westemblot结果显示,在40kD处呈现单一蛋白条带,该蛋白具有阻断CD4^+CD25^+T细胞免疫抑制功能的作用,双向免疫扩散结果显示兔抗小鼠GITRL抗血清效价为1:16。结论:成功构建GITRL原核表达质粒,制备和纯化的G1TRL融合蛋白具有较好的纯度和生物学功能,制备并获得特异性抗血清,可用于G1TRL融合蛋白生物学活性的进一步研究。
 
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