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抗TfR-scFv-EGFP融合蛋白的构建与表达

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-11-21  浏览次数:6
摘 要:目的:抗转铁蛋白受体单链抗体(TfR-scFv)-EGFP融合蛋白真核表达载体的构建与表达。方法:设计两对引物引入连接肽(Gly4Ser)3以及酶切位点HindⅢ和BamHⅠ,采用重叠延伸PCR扩增与
  • 【题 名】抗TfR-scFv-EGFP融合蛋白的构建与表达
  • 【作 者】代维 刘静 黄鹤 文雪 袁晓梅 雷萍 朱慧芬 沈关心
  • 【机 构】[1]华中科技大学同济医学院免疫学系,武汉430030 [2]华中科技大学同济医学院附属同济医院,武汉430030
  • 【刊 名】《中国免疫学杂志》 2009年第25卷第10期,936-939页
  • 【关键词】转铁蛋白受体 单链抗体 重叠延伸PCR
  • 【文 摘】目的:抗转铁蛋白受体单链抗体(TfR-scFv)-EGFP融合蛋白真核表达载体的构建与表达。方法:设计两对引物引入连接肽(Gly4Ser)3以及酶切位点HindⅢ和BamHⅠ,采用重叠延伸PCR扩增与构建具有前导肽的L-VH-Linker-VL单链抗体基因,亚克隆至pEGFP-N1,转染COS-7细胞,倒置相差荧光显微镜下观察荧光蛋白表达,流式细胞术(FCM)检测细胞分泌上清与乳腺癌细胞MCF-7及黑色素瘤细胞A375结合活性。结果:测序表明获得了正确的L-VH-Linker-VL单链抗体基因序列;亚克隆至pEGFP-N1后,表达载体转染COS-7细胞,经荧光显微镜观察转染细胞,及通过流式细胞术(FCM)检测细胞分泌上清,证实抗TfR-scFv-EGFP融合蛋白在转染细胞中分泌性表达,并能够与天然高表达TfR的细胞特异性结合。结论:抗TfR-scFv-EGFP融合蛋白真核表达载体构建成功,其表达产物具有与TfR阳性细胞结合的活性。
 
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  • (1) 转铁蛋白受体,单链抗体,重叠延伸PCR
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