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小鼠β-防御素2与甲型流感病毒HA1融合基因真核载体的构建与表达

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-11-21  浏览次数:2
摘 要:目的:构建小鼠β-防御素2(mBD2)与甲型流感病毒A/PR/8/34(H1N1)血凝素(HA1)基因融合表达的真核载体,并检测其在HEK293细胞中的表达。方法:用PCR技术分别从质粒pcDNA3.
  • 【题 名】小鼠β-防御素2与甲型流感病毒HA1融合基因真核载体的构建与表达
  • 【作 者】朱元军 张卫东 李虹 王丰平 钟利 蒋忠华 李明远
  • 【机 构】四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室,成都610041
  • 【刊 名】《中国免疫学杂志》 2008年第24卷第1期,8-10页,15页
  • 【关键词】β-防御素 流感病毒 融合基因 重叠延伸PCR 免疫荧光
  • 【文 摘】目的:构建小鼠β-防御素2(mBD2)与甲型流感病毒A/PR/8/34(H1N1)血凝素(HA1)基因融合表达的真核载体,并检测其在HEK293细胞中的表达。方法:用PCR技术分别从质粒pcDNA3.1(+)/mBD2和peDNA3.1(+)/HA1中扩增mBD2与HA1基因片段,再用重叠延伸PCR法(overlap-PCR)将HA1与mBD2通过一段多肽接头Gly4Ser融合为mBD2-HA1。将mBD2-HA1融合基因插入真核表达载体pcDNA3.1(+),经酶切、PCR和测序鉴定正确后,用脂质体转入HEK293细胞,通过免疫荧光检测其瞬时表达。结果:融合基因mBD2-HA1的真核表达载体pcDNA3.1(+)/mBD2-HA1构建成功,并在HEK293细胞中成功表达融和蛋白。结论:融合基因mBD2-HA1真核表达载体的成功构建,为研究防御素在流感病毒核酸疫苗中的佐剂作用奠定了基础。
 
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  • (1) β-防御素,流感病毒,融合基因,重叠延伸PCR,免疫荧光
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