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小鼠白细胞介素23基因在毕赤酵母中的诱导表达及初步活性研究

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-11-21  浏览次数:3
摘 要:目的:克隆小鼠白细胞介素23(mice interlecukin-23,mIL-23)基因,构建高效稳定的毕赤酵母表达菌株,并对得到的蛋白进行生物活性的初步测定。方法:采用聚合酶链式反应(PCR)技术
  • 【题 名】小鼠白细胞介素23基因在毕赤酵母中的诱导表达及初步活性研究
  • 【作 者】杨建岭 姚智燕 杨艺红 魏林
  • 【机 构】[1]河北医科大学免疫学教研室,石家庄050017 [2]河北师范大学生命科学学院分子细胞研究室,石家庄050016
  • 【刊 名】《中国免疫学杂志》 2010年第2期,120-123页
  • 【关键词】白细胞介素23 克隆表达 毕赤酵母 生物活性
  • 【文 摘】目的:克隆小鼠白细胞介素23(mice interlecukin-23,mIL-23)基因,构建高效稳定的毕赤酵母表达菌株,并对得到的蛋白进行生物活性的初步测定。方法:采用聚合酶链式反应(PCR)技术从pcDNA3-mIL-23上分别扩增获得IL-23的两亚基p19和p40,并通过重叠PCR(over-lapPCR)技术获得含有连接子的p1940,构建pPICZaA―IL-23重组质粒;采用甲醇诱导毕赤酵母表达重组蛋白,MTT方法检测诱导表达蛋白的促淋巴细胞增殖情况。结果:SDS-PAGE分析显示在诱导24小时和36小时后的上清及24-96小时的沉淀中均可以检测到约70kD的诱导条带。Western blot印迹法证实了重组蛋白为特异性蛋白。上清和沉淀中表达的重组蛋白IL-23能促进外周血单个核细胞的增殖,0D570nm分别达到(0.235±0.029)和(0.216±0.035),而未刺激的对照组只有(0.135±0.008)和(0.164±0.017)。结论:成功构建出mIL-23的酵母表达载体,诱导产生的蛋白可以明显地促进外周血单个核细胞的增殖。
 
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