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人端粒酶hTERT抗体制备、鉴定及在肿瘤检测中的应用

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-11-21  浏览次数:1
摘 要:目的:人端粒酶蛋白亚基(hTERT)单克隆抗体制备及肿瘤检测应用。方法:利用多肽固相合成法(Fmoc法)合成hTERT抗原多肽,免疫BALB/c小鼠,以杂交瘤法制备单克隆抗体。应用ELISA,West
  • 【题 名】人端粒酶hTERT抗体制备、鉴定及在肿瘤检测中的应用
  • 【作 者】杨邵敏 卫建平 等
  • 【机 构】[1]北京大学医学部病理学系100083 [2]太原山西医科大学第二附属医院病理科
  • 【刊 名】《中华病理学杂志》 2002年第31卷第1期,50-54页
  • 【关键词】端粒 末端转移酶 单克隆抗体 肿瘤 端粒酶 hTERT抗体 检测
  • 【文 摘】目的:人端粒酶蛋白亚基(hTERT)单克隆抗体制备及肿瘤检测应用。方法:利用多肽固相合成法(Fmoc法)合成hTERT抗原多肽,免疫BALB/c小鼠,以杂交瘤法制备单克隆抗体。应用ELISA,Western blot和免疫组织化学ABC法进行鉴定和肿瘤检测。结果:经合成得到hTERT抗原多肽hTERT9,免疫小鼠及细胞融合后得到抗hTERT9杂交瘤细胞;经3次有限稀释法及ELISA筛选获得抗hTERT9单克隆抗体的杂交瘤细胞H4、G8和A11;H4、G8为IgM类,而A11为IgG1。半抗原竞争性抑制实验证明为hTERT9特异性单克隆抗体;相对亲和力实验发现G8株亲和力较H4株和A11株强。用H4及G8株单克隆抗体检测HeLa、293细胞,免疫印迹有特异相对分子质量≈123000hTERT条带,免疫组织化学显示为细胞核着色,而正常细胞2BS无阳性反应。免疫组织化学方法检测人癌组织、癌前病变、良性病变hTERT表达发现:人肿瘤组织细胞阳性率为80.31%(102/127),且大多为中度阳性和强阳性;癌前病变中,hTERT有17.5%(7/40)弱阳性;良性肿瘤均为阴性。统计学分析表明:hTERT在癌组织的表达显著高于癌前及良性病变(P<0.01)。结论:通过固相合成hTERT抗原多肽和杂交瘤技术成功制备抗人端粒酶蛋白亚基hTERT单克隆抗体,并能运用于免疫印迹、免疫组织化学对癌细胞及组织的hTERT表达检测。
 
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