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人NHE-1基因miRNA干扰载体构建、鉴定及干扰效应评价

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-11-23  浏览次数:4
摘 要:目的构建人钠氢交换蛋白-1(NHE-1)基因的miRNA特异性干扰表达载体并转染293细胞,筛选其有效性。方法设计4对miRNA oligo,依次通过退火、连接,构建含NHE-1前体miRNA的重组干
  • 【题 名】人NHE-1基因miRNA干扰载体构建、鉴定及干扰效应评价
  • 【作 者】黄美风 方伯言
  • 【机 构】辽宁医学院研究生院 辽宁锦州121001 辽宁医学院附属第一医院神经内科 辽宁锦州121001
  • 【刊 名】《中国现代医学杂志》2010年 第18期 2721-2724页 共5页
  • 【关键词】钠氢交换蛋白-1 干扰载体 干扰效应
  • 【文 摘】目的构建人钠氢交换蛋白-1(NHE-1)基因的miRNA特异性干扰表达载体并转染293细胞,筛选其有效性。方法设计4对miRNA oligo,依次通过退火、连接,构建含NHE-1前体miRNA的重组干扰质粒pcDNATM 6.2-GW/NHE-miR和阴性对照质粒pcDNATM 6.2-GW/neg-miR,并转染293细胞,经Re-al-Time PCR评价干扰效应,筛选出干扰效应最佳的靶序列。结果测序证实目的片段正确插入载体中,成功构建4个人NHE-1基因miRNA干扰载体;Real-Time PCR证实完成干扰效应评价,并根据NHE-1基因转录调控区及其蛋白分子结构功能区评价结果,得到NHE1-4是最佳干扰片段。结论成功构建针对人NHE-1基因的miRNA特异性有效干扰质粒,为后续NHE-1基因腺病毒miRNA表达载体的构建及其在调控APP裂解相关酶类的功能研究奠定了基础。
 
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