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薇甘菊水杨酸羧甲基转移酶基因的分离鉴定及表达分析

放大字体  缩小字体 更新日期:2018-11-26  浏览次数:5
摘 要:为研究水杨酸羧甲基转移酶基因在植物防御系统中的作用,采用RACE法从薇甘菊(Mikania micrantha)cDNA文库中克隆到薇甘菊水杨酸羧甲基转移酶基因SAMT全长cDNA,并进行外源表达以及
  • 【题 名】薇甘菊水杨酸羧甲基转移酶基因的分离鉴定及表达分析
  • 【作 者】王文天 彭少麟 李冬梅 王冬梅 王瑞龙 田彩娟 赵厚本 户桂敏
  • 【机 构】中国科学院华南植物园 广东广州510650 中国科学院研究生院 北京100049 中山大学生命科学学院 广东广州510275
  • 【刊 名】《热带亚热带植物学报》2009年 第5期 445-450页 共6页
  • 【关键词】薇甘菊 SAMT RACE 原核表达 Western blot RT-PCR
  • 【文 摘】为研究水杨酸羧甲基转移酶基因在植物防御系统中的作用,采用RACE法从薇甘菊(Mikania micrantha)cDNA文库中克隆到薇甘菊水杨酸羧甲基转移酶基因SAMT全长cDNA,并进行外源表达以及水杨酸诱导模式分析。结果表明,该基因cDNA全长1299bp,其中编码区长1089bp,编码362个氨基酸,Blast显示该基因编码的氨基酸序列与仙女扇(Clarkia brewen)的相似性为74%,证实其主要功能是将水杨酸(saficylic acid,SA)甲基化成水杨酸甲酯(methyl salicylate,MESA),由此将该基因命名为MmSAMT,GenBank登录号为FJ869889。将MmSAMT编码序列克隆至pET-32a(+)载体,转化Rosetta-gami(DE3)中表达,SDS-PAGE显示单体分子量在40kD左右,与预测结果一致。Western blot显示在20℃、0.05mmol/L IPTG和180r min^-1下诱导6h,可获得较多的可溶性蛋白质。对喷施100μmol/L SA薇甘菊叶片中MmSAMT的转录谱进行研究,该基因的诱导受到SA的激活,48h的表达水平达最高,暗示MmSAMT可能通过催化合成MeSA引发系统获得性抗性,提高抗性防御的警戒等级。
 
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