关注:797 2009-07-23 13:39

Caco-2细胞转运实验的难题 !!!

已解决 悬赏分:0 - 解决时间 2016-02-10 22:49

本人做了一个二萜内酯类化合物的Caco-2转运实验考察转运方式,发现其对温度敏感,故用了一种ATP抑制剂(碘乙酰胺)想进一步证实是由载体介导的转运,结果加了抑制剂后体现不出差异!我想问一下可能出的问题在哪里?还有我还可以用哪些方法证明该药的转运方式。
我考察过的一些条件:双向转运浓度、时间因素的影响,结果AP-BL侧出现了饱和现象。
恳请各位指点迷津!

  支持(0)  |   反对(0)   |  我来评论 2009-07-23 13:47

考察细胞转运,主要从被动转运和细胞载体介导转运两个方面来考察。通过测定Papp值,如果A to B 和B to A的值相近,那么可确定是被动转运;如果不同,可能确定是载体介导转运。然后有抑制试验来确定是否是载体介导的转运。
不知道你使用什么检测方法来测定膜两侧的浓度,建议使用高灵敏度的仪器如LC-MS来测定,这样浓度有微小的变化就可显示出来。