关注:979 2010-06-04 11:55

稀释后,峰面积不成比例的降低~

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用HPLC分析一样品,稀释后,峰面积不成比例的降低,稀释溶剂为流动相,流动相中含有离子对试剂,辛烷磺酸钠,样品为甲酸酸盐,柱子为普通C18柱子。
样品浓度和峰面积如下(进样量20ul):1mg/ml对应的峰面积为64868427;100ug/ml对应的峰面积为6283470;10ug/ml对应的峰面积为593056;1ug/ml对应的峰面积为46244
尝试过以下解决方式:
1.同一样品,如1ug/ml的样品重复进样后,发现相同样品的精密度较好。
2.不同浓度的样品的紫外扫描图重合,没有发现偏移现象
3.100ug/ml浓度的样品进不同体积后,峰面积分别为5981202(20ul),2963399(10ul),1471368(5ul),562819(2ul)。

从目前的结果看,排除样品的稳定性和精密度的差异。溶剂稀释后的差异如10倍与单纯通过改变进样量没明显差异,所以现在不知道是什么原因导致溶液体积越大,样品浓度越小?不知道大家有没有相似的经历,望指教。谢谢!