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人源性纤溶酶原Kringle5基因杆状病毒表达载体构建及蛋白表达纯化

放大字体  缩小字体 更新日期:2016-02-07  浏览次数:1
摘 要:目的构建重组人源性纤溶酶原Kringle5(rhK5)杆状病毒表达载体并进行真核表达。方法采用bac-to―bac杆状病毒表达系统制备杆状病毒Bacmid―rhK5,感染草地贪夜蛾卵巢细胞sf21昆虫
  • 【题 名】人源性纤溶酶原Kringle5基因杆状病毒表达载体构建及蛋白表达纯化
  • 【作 者】董丽 郭睿 李彪
  • 【机 构】上海交通大学医学院瑞金医院核医学科,上海200025
  • 【刊 名】《世界感染杂志》 2009年第9卷第2期,106-106页
  • 【关键词】杆状病毒表达载体 Kringle5基因 蛋白表达 纤溶酶原 表达载体构建 人源性 纯化 Westernblot
  • 【文 摘】目的构建重组人源性纤溶酶原Kringle5(rhK5)杆状病毒表达载体并进行真核表达。方法采用bac-to―bac杆状病毒表达系统制备杆状病毒Bacmid―rhK5,感染草地贪夜蛾卵巢细胞sf21昆虫细胞,经Westernblot确定rhK5在sf21细胞中的表达方式和表达量。用血管内皮细胞抑制实验检测纯化蛋白活性。结果杆状病毒表达载体pFastBacHTB-rhK5构建成功,Westernblot检测发现,rhK5在sf21细胞中呈胞内表达,纯化后重组蛋白的产量约为90μg/L。血管内皮细胞抑制实验显示,半数有效剂量(ED50)为4μg/mL。结论rhK5杆状病毒表达载体于悬浮培养的sf21细胞中高效表达,为大量表达更接近天然的具有生物学活性的rhK5蛋白奠定了基础。
 
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