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采用荧光定量PCR检测JAK2基因V617F突变

放大字体  缩小字体 更新日期:2016-02-07  浏览次数:112
摘 要:目的建立荧光定量PCR检测JAK2基因V617F突变的方法,评估JAK2 V617F突变在诊断骨髓增殖性疾病和白血病中的临床意义。方法选取71例慢性粒细胞性白血病(CML)、22例原发性血小板增多症(
  • 【题 名】采用荧光定量PCR检测JAK2基因V617F突变
  • 【作 者】张心菊[1] 顾小叶[1] 刘双春[2] 马玮哲[1] 关明[3]
  • 【机 构】[1]复旦大学附属华山医院中心实验室,上海200040 [2]浙江省台州市立医院检验科 [3]复旦大学附属华山医院检验科
  • 【刊 名】《中华检验医学杂志》 2009年第32卷第5期,583-586页
  • 【关键词】骨髓增殖性疾病 白血病 Janus激酶2 突变 聚合酶链反应
  • 【文 摘】目的建立荧光定量PCR检测JAK2基因V617F突变的方法,评估JAK2 V617F突变在诊断骨髓增殖性疾病和白血病中的临床意义。方法选取71例慢性粒细胞性白血病(CML)、22例原发性血小板增多症(ET)、11例原发性骨髓纤维化(PMF)、9例真性红细胞增多症(PV)、7例嗜酸粒细胞增多症患者,分别采用荧光定量PCR、突变特异性扩增系统(ARMS)对JAK2 V617F突变进行检测,并采用基因测序对结果进行验证。将具有JAK2 V617F纯合子突变的人类红白血病细胞株(HEL)DNA作为阳性对照,比较荧光定量PCR和ARMS对JAK2基因V617F突变的检测敏感度。结果采用荧光定量PCR检测,野生型的熔解温度(Tm)峰出现于(75.0±0.2)℃处,突变型的Tm峰出现于(76.6±0.2)℃处。JAK2基因V617F突变在PV、ET、PMF等骨髓增殖性疾病中的检出率分别为8例(88.9%)、12例(54.5%)、7例(63.6%),但在71例CML中只检出1例(1.4%)。荧光定量PCR与ARMS的结果符合率为100%,结果经过测序证实。使用荧光定量PCR法可在每10^6个正常白细胞中检出低至10^2个HEL细胞,而使用ARMS方法时要在每10^6个正常白细胞中HEL细胞达到10^4个时,方可检测出,前者比后者方法灵敏100倍。结论成功地建立了荧光定量PCR检测JAK2基因V617F突变的方法,比ARMS更灵敏、简便,适合临床使用。JAK2基因V617F突变在骨髓增殖性疾病中有较高的检出率,可作为骨髓增殖性疾病特异性诊断指标。
 
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