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细菌革兰双检荧光定量PCR方法检测新生儿败血症

放大字体  缩小字体 更新日期:2016-02-07  浏览次数:2
摘 要:目的建立细菌革兰阴、阳性菌双重实时荧光定量检测体系,探讨其检测败血症的临床应用价值。方法分析细菌16SrRNA基因序列,在高度保守区自行设计通用引物和革兰阴性和阳性分型探针,选取临床较常见的35株菌株
  • 【题 名】细菌革兰双检荧光定量PCR方法检测新生儿败血症
  • 【作 者】楼金吐 吴亦栋 李建平 陈理华 陈露萍 尚世强
  • 【机 构】浙江大学医学院附属儿童医院中心实验室浙江省新生儿疾病诊治重点实验室,杭州310003
  • 【刊 名】《中华检验医学杂志》 2009年第32卷第5期,547-551页
  • 【关键词】脓毒症 革兰氏阳性菌 革兰氏阴性菌 聚合酶链反应 细菌学技术 婴儿,新生
  • 【文 摘】目的建立细菌革兰阴、阳性菌双重实时荧光定量检测体系,探讨其检测败血症的临床应用价值。方法分析细菌16SrRNA基因序列,在高度保守区自行设计通用引物和革兰阴性和阳性分型探针,选取临床较常见的35株菌株进行细菌革兰双检实时荧光定量PCR方法检测;对临床疑为败血症的512例新生患儿分别做细菌革兰双检荧光定量PCR和血培养检测。结果细菌革兰双检荧光定量PCR具有较好的敏感性和特异性,能稳定检测到10CFU左右细菌数。35株菌株进行细菌革兰双检荧光定量PCR检测,均为阳性,且革兰阴、阳性菌能正确分型和定量。巨细胞病毒、EB病毒、乙肝病毒、新型隐球菌及白色念珠菌、人基因组DNA及空白对照均为阴性。对临床疑为败血症的512份新生患儿标本中,革兰双检荧光定量PCR检测血标本阳性率8.20%(42/512),血培养阳性率6.25%(32/512),前者明显高于后者,差异具有统计学意义(χ^2=8.10,P〈0.01),30例非感染性疾病同期患儿血标本革兰双检荧光定量PCR及细菌培养均为阴性。若以血培养作为对照,细菌革兰双检荧光定量PCR方法的诊断敏感度为100%,特异度为97.92%,准确性98.05%。结论建立了用通用引物和分型双荧光探针的细菌革兰双检荧光定量PCR方法。其检测快速、准确,具有很大的临床推广价值。
 
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