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重组人中性粒细胞弹性蛋白酶的制备及鉴定

放大字体  缩小字体 更新日期:2016-02-09  浏览次数:0
摘 要:目的:利用基因工程技术制备纯化的重组人中性粒细胞弹性蛋白酶(HNE),为进一步制备HNE的相应抗体和建立精液HNE的检测方法奠定基础。方法:利用HNE的特异引物从人外周血粒细胞中获得HNEmRNA,并
  • 【题 名】重组人中性粒细胞弹性蛋白酶的制备及鉴定
  • 【作 者】陆金春 卢坤刚 张红烨 高建 冯瑞祥
  • 【机 构】武警江苏总队南京医院检验科 江苏南京210028 南京欣迪生物药业工程有限责任公司 江苏南京211112 南京医科大学附属南京第一医院检验科 江苏南京210006
  • 【刊 名】《中华男科学杂志》2011年 第12期 1078-1082页 共5页
  • 【关键词】中性粒细胞 弹性蛋白酶 重组蛋白 原核表达
  • 【文 摘】目的:利用基因工程技术制备纯化的重组人中性粒细胞弹性蛋白酶(HNE),为进一步制备HNE的相应抗体和建立精液HNE的检测方法奠定基础。方法:利用HNE的特异引物从人外周血粒细胞中获得HNEmRNA,并将其cDNA克隆入质粒pGEX-2T中以获得重组质粒pGEX-2T/HNE。重组质粒经PCR、双酶切和基因测序鉴定后转入感受态大肠埃希菌DH5α中,并用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组融合蛋白GST/HNE。重组融合蛋白经凝血酶裂解后获得重组HNE,并经谷胱甘肽琼脂糖珠纯化后获得纯化的重组HNE。结果:成功制备重组表达质粒pGEX-2T/HNE,并转化人大肠埃希菌DH5α中。经IPTG在18℃过夜诱导后成功获得重组融合蛋白GST/HNE的表达。经凝血酶裂解和谷胱甘肽琼脂糖珠纯化后成功获得纯化的重组蛋白HNE。结论:纯化的重组HNE的获得为进一步制备HNE的相应抗体和建立精液HNE的检测方法奠定了基础。
 
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